骨質(zhì)疏松大鼠正畸牙齒移動對牙根吸收的影響.pdf

1、目的:建立雌激素缺乏骨質(zhì)疏松大鼠的實驗動物模型,進行正畸牙齒移動,通過觀察大鼠正畸牙齒移動速度、破骨細胞及破牙骨質(zhì)細胞計數(shù)、以及齦溝液內(nèi)牙本質(zhì)涎蛋白(dentin Ssaloprotein,DSP)和牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentin sialophosphoproteins,DSPP)在加力不同時間段的表達,研究骨質(zhì)疏松大鼠正畸牙齒移動牙根吸收的特點。
　　 方法:選取6月齡雌性Wistar大鼠50只,隨機分為10組,即骨質(zhì)疏松組:

2、加力0天、5天、7天、10天、14天;健康對照組:加力0天、5天、7天、10天、14天。每組5只。骨質(zhì)疏松各組切除大鼠雙側(cè)卵巢,造成雌激素缺乏骨質(zhì)疏松實驗動物模型,健康對照組施行假手術。
　　 術后6個月在各組大鼠雙側(cè)上頜第一磨牙及中切牙間安裝Ni-Ti螺旋拉簧,牽引上頜第一磨牙向近中移動,力值約0.49N,建立正畸牙齒移動的實驗動物模型。
　　 在加力前及加力0、5、7、10、14天后,利用預制的特殊托盤和藻酸鹽印模材

3、制取加力前后大鼠雙側(cè)上頜磨牙區(qū)的精確模型,超硬石膏灌注。體視顯微鏡觀察測量超硬石膏模型,記錄上頜第一磨牙移動距離。所有模型由同一人測量三遍。
　　 分別于加力0、5、7、10、14天后,利用15＃吸潮紙尖吸取各組大鼠上頜第一磨牙腭側(cè)齦溝液,通過Western blot方法檢測各組齦溝液樣本內(nèi)DSP、DSPP的表達。
　　 切取大鼠雙側(cè)上頜骨標本(包含上頜三顆磨牙及其牙周組織),各組實驗動物于預定時間經(jīng)4％多聚甲醛經(jīng)心臟灌

4、注處死,常規(guī)固定、脫鈣、脫水、包埋,制作上頜磨牙及其牙周組織的石蠟切片。進行HE和TRAP染色,計數(shù)破骨細胞及破牙骨質(zhì)細胞,觀察牙根吸收的情況。同時取各組實驗動物左后肢股骨、脛骨及椎骨,使用雙能X線骨密度檢測儀,應用小動物軟件測定其骨密度。
　　 所有數(shù)據(jù)利用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,進行t檢驗,以P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.骨質(zhì)疏松動物模型鑒定骨密度測量值顯示,切除大鼠雙側(cè)卵巢6個月后

5、,其左后肢股骨、脛骨和腰椎(L2～L4)的骨密度分別為0.19+0.01 g/cm2、0.14+0.01 g/cm2、0.17+0.01 g/cm2,對照組左后肢股骨、脛骨和腰椎(L2～L4)的骨密度分別為0.20±0.01 g/cm2、0.15±0.01 g/cm2、0.21±0.02g/cm2且P＜0.05,骨質(zhì)疏松組和健康對照組各組間差異有統(tǒng)計學意義。
　　 2.大體標本觀察骨質(zhì)疏松加力5、7、10、14天組實驗動物上頜第

6、一磨牙均明顯近中移動,并有輕微的殆向伸長,上頜第一、二磨牙間存在肉眼可見間隙。健康對照加力7、10、14天組實驗動物第一磨牙明顯近中移動及(牙合)向伸長,上頜第一、二磨牙間有肉眼可見間隙。
　　 3.上頜第一磨牙移動距離經(jīng)體視顯微鏡測量超硬石膏模型,相同加力時間牙齒移動距離分別為:加力5天骨質(zhì)疏松組74.14±4.38μm,健康對照組58.03±6.40μm;加力7天骨質(zhì)疏松組169.96±28.97μm,健康對照組127.87

7、±6.05μm;加力10天骨質(zhì)疏松組260.84±41.85μm,健康對照組195.61±9.53μm;加力14天骨質(zhì)疏松組182.72±21.39μm,健康對照組250.09±28.21μm;P＜0.05,相同加力時間骨質(zhì)疏松組和健康對照組各組間差異有統(tǒng)計學意義。
　　 4.組織切片觀察骨質(zhì)疏松組各組石蠟切片標本經(jīng)HE染色,光鏡下可見破骨細胞、破牙骨質(zhì)細胞,牙槽骨吸收和牙根吸收。對照組各組石蠟切片標本經(jīng)HE染色,光鏡下可見破骨

8、細胞、破牙骨質(zhì)細胞及牙槽骨吸收,牙根吸收達牙本質(zhì)層。且此種趨勢隨加力時間延長,愈加明顯。各組TRAP染色均有陽性表達。
　　 相同加力時間破牙骨質(zhì)細胞計數(shù)分別為:加力5天骨質(zhì)疏松組1.50±1.58,健康對照組5.20±2.30;加力7天骨質(zhì)疏松組1.90±2.56,健康對照組5.80±3.74;加力10天骨質(zhì)疏松組3.40±2.59,健康對照組12.00±12.32;加力14天骨質(zhì)疏松組2.40±1.26,健康對照組4.20±

9、1.81:P＜0.05,相同加力時間骨質(zhì)疏松組和健康對照組各組間差異有統(tǒng)計學意義。
　　 相同加力時間破骨細胞計數(shù)分別為:加力5天骨質(zhì)疏松組9.40±1.78,健康對照組2.20±1.40;加力7天骨質(zhì)疏松組11.60±2.88,健康對照組4.50±2.12;加力10天骨質(zhì)疏松組6.20±1.75,健康對照組4.50±1.78:加力14天骨質(zhì)疏松組4.50±1.78,健康對照組2.30±1.95;P＜0.05,相同加力時間骨質(zhì)疏

10、松組和健康對照組各組間差異有統(tǒng)計學意義。
　　 5.DSPP、DSP的Western blot檢測結(jié)果利用15＃吸潮紙尖提取大鼠上頜第一磨牙腭側(cè)齦溝液后,Westernblot結(jié)果顯示骨質(zhì)疏松加力7～14天各組樣本DSPP、DSP均有表達,加力5天組僅有DSPP表達。對照組加力5～14天樣本:DSPP、DSP均有表達。
　　 利用BandScan V5.0圖像分析軟件對各組樣本DSPP和DSP進行灰度分析結(jié)果顯示,Wes

11、tern blot結(jié)果加力5天,骨質(zhì)疏松組為118.60±7.89,健康對照組為156.60±16.46;加力7天,骨質(zhì)疏松組為132.00±9.57,健康對照組為177.80±13.55;加力10天,骨質(zhì)疏松組為118.60±16.33,健康對照組為178.00±9.97;加力14天,骨質(zhì)疏松組為113.60±14.94,健康對照組為169.80±13.81;P＜0.05,相同加力時間骨質(zhì)疏松組和健康對照組各組間差異有統(tǒng)計學意義。