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文檔簡介
1、傘形科植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)是我國四川省著名的道地中藥材。川芎在全國有著較為廣泛的分布,主產四川省都江堰市。川芎以其干燥的根狀莖入藥,在臨床上可用于治療多種疾病。川芎的根狀莖中富含大量的藥用成份,而在川芎的代用品研究中證實,川芎根中揮發(fā)油含量及有效成份與根狀莖基本相同。故以其根為外植體誘導生成的愈傷組織中也很有可能含有藥用有效成分,在生產和臨床上可能有一定的參考價值。 本實驗以川芎的根
2、為外植體進行組織培養(yǎng),通過器官發(fā)生途徑獲得了大量的組培苗。川芎根的愈傷組織誘導的最佳培養(yǎng)基配方為MS+6 BA 0.8 mg/L(單位下同)+NAA 1.2;根愈傷組織分化不定芽的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.2+IAA0.3;生根培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA 1.0+NAA 0.7。以川芎根為外植體誘導出的愈傷組織中是否含有藥用成份,還需要進一步的實驗探索和證實。 在組織培養(yǎng)研究中,同時以川芎的莖段和葉片為外植體作為對照。
3、 因為在川芎組織培養(yǎng)過程中很容易出現黃化苗和玻璃苗,故在實驗中篩選出壯苗培養(yǎng)基(MS+GA<,3>,1.2+6-BA 1.8+IAA 0.3),可以使小苗在較短時間內(14d左右)成長健壯,并且使黃化苗和玻璃苗的發(fā)生率大大降低。 以上培養(yǎng)基均選用pH 5.8,瓊脂0.6%~0.7%。經過煉苗后,組培苗移栽成活率達98%。在農桿菌介導轉化法進行植物遺傳轉化的研究中,抗生素種類和濃度的選擇是獲得轉化植株的一個重要前提。植物轉基
4、因中常用的抗生素根據其用途分為兩大類:一類是抑菌劑,用于植物受體材料感染農桿菌共培養(yǎng)后的脫菌(去除農桿菌)和防止雜菌污染;另一類是選擇劑,用于篩選轉化體和檢測轉基因后代。 本實驗以川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的根、莖段、葉片及其對應的愈傷組織作為實驗材料,研究了四種抗生素對其生長的影響。在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度和不同種類的抗生素,比較其對川芎不同外植體及其對應愈傷組織生長的影響。方差分析和總體
5、觀察的結果表明,當篩選轉化植株的抗生素為卡那霉素時,其最佳抗性篩選濃度為20-40mg/L;當篩選轉化植株的抗生素為利福平時,其最佳抗性篩選濃度約為200mg/L。 氨芐青霉素和特美汀是兩種抑菌性抗生素。抑菌劑的使用原則是達到抑菌目的的同時使抗生素對植物愈傷組織形成和分化的影響最小,即盡量降低其濃度。在本實驗中,特美汀對川芎外植體的毒害作用較大,因此不選擇它作為抑菌劑;氨芐青霉素對川芎外植體的生長影響較小,因此可以考慮選擇它作為
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