鳳丹組織培養(yǎng)及培養(yǎng)條件對愈傷組織中丹皮酚含量的影響.pdf

1、鳳丹(Paeonia ostii)為芍藥科芍藥屬多年生小灌木牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）品種，集藥、食、觀賞為一體，尤其以其根皮中丹皮酚具有良好的臨床應(yīng)用和開發(fā)價值。植物組織培養(yǎng)技術(shù)是獲得整齊一致材料的快捷途徑。國內(nèi)外對于牡丹組織培養(yǎng)的研究集中在觀賞型牡丹品種無菌試管苗的獲得上，針對牡丹（尤其是藥用品種）的生理生化研究鮮有報道。本研究以藥用品種鳳丹為研究材料，從愈傷組織培養(yǎng)的最佳外植體材料、消毒方式、培養(yǎng)

2、基配方以及根、芽誘導再生條件等多方面展開研究，為藥用品種牡丹的組織培養(yǎng)提供理論參考。同時，以愈傷組織為材料，研究了外界不同銅濃度、激素配比、光質(zhì)條件、酚類物質(zhì)合成前體濃度等因素，探究了丹皮酚合成的影響因素，為丹皮酚的合成以及利用組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)丹皮酚提供理論基礎(chǔ)。
　　 1鳳丹組織培養(yǎng)
　　 對鳳丹不同外植體材料進行愈傷組織誘導，結(jié)果顯示:通過赤霉素處理獲得的幼嫩葉柄為愈傷組織誘導的最佳外植體材料;次氯酸鈉溶液作為消毒劑

3、的最佳濃度為2.5％，消毒時間為15-20min; MS、1/2MS、WPM這三種不同基本培養(yǎng)基下的褐化率沒有顯著差異，則選擇較低無機鹽離子濃度的基本培養(yǎng)基并不能有效的降低褐化率;添加1000 mg·L-1 PVP對防止褐化效果顯著，可以使褐化率降低為0％;愈傷組織誘導以及增殖的最優(yōu)培養(yǎng)基配方為:MS+BA1.0 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1+LH500mg·L-1+PVP1000 mg·L-1，其誘導率可達97％以上，增重

4、倍數(shù)為2.86;光照條件下愈傷組織增殖倍數(shù)顯著高于暗培養(yǎng);解偶聯(lián)劑DNP的添加顯著抑制愈傷組織的增殖生長，而添加Phe可以顯著提高愈傷組織的增殖倍數(shù)，但不同濃度處理間差異不顯著。愈傷組織誘導芽的分化很難實現(xiàn)，不同濃度配比的BA與NAA組合均未能成功誘導出芽。愈傷組織可以成功誘導出不定根，NAA是成功誘導不定根的關(guān)鍵因素。愈傷組織在NAA濃度為1.0mg·L-1或1.5mg·L-1時可以成功誘導出不定根，但是出根率很低。
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5、外界條件對愈傷組織丹皮酚含量的影響
　　 銅濃度:通過調(diào)整培養(yǎng)基中Cu2+濃度(0.00025、0.025、2.5、25 mg·L-1)，研究了銅對鳳丹愈傷組織中丹皮酚含量的影響。結(jié)果顯示:丹皮酚含量及總量都隨著Cu2+濃度的升高而提高，除了兩個低濃度水平銅處理無顯著差異外，高濃度Cu2+處理下丹皮酚含量以及總量都顯著高于低濃度處理;對銅與丹皮酚含量進行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)它們二者之間呈極顯著正相關(guān)，即適量Cu2+添加可以有效促進丹

6、皮酚的合成。
　　 光質(zhì):不同光質(zhì)下鳳丹愈傷組織中丹皮酚含量及總量的增加量從大到小的順序是:藍光＞紅光＞黑暗＞熒光，除了藍光與紅光條件下培養(yǎng)差異不顯著外，其他各處理間差異顯著;熒光燈下培養(yǎng)后的愈傷組織中丹皮酚總量的變化量為負值，可見熒光燈下培養(yǎng)使丹皮酚進行了分解，抑制了丹皮酚的合成。
　　 6-BA與NAA:以愈傷組織為材料，在含有不同濃度6-BA和NAA的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)10d，研究單因素6-BA和NAA以及二者交互作

7、用對丹皮酚含量的影響，結(jié)果顯示:單因素試驗中，適當提高6-BA或NAA濃度可以顯著提高丹皮酚含量，二者都是以濃度為1.0 mg·L-1時丹皮酚含量最高。在6-BA與NAA交互作用的所有處理組合中，以BA1.0 mg·L-1+NAA1.0 mg·L-1組合培養(yǎng)下的丹皮酚含量最高。
　　 DNP與Phe:0.2、0.5、1.0mmol·L-1濃度DNP處理4d明顯抑制了愈傷組織的生長，0.5、1.0mmol·L-1濃度DNP的添加使