蒼耳組織培養(yǎng)、快繁體系及愈傷組織提取物的抑菌活性研究.pdf

1、化學農藥的長期使用，產生了嚴重的“3R”問題(即抗藥性Resistance，再猖獗Resurgence，農藥殘留Residence)。從植物中尋找對有害生物有生物活性的次生代謝物，經(jīng)分離、提純或作為人工合成新農藥品種的模板已成為當代農藥研究的經(jīng)典。 蒼耳在醫(yī)藥、農藥等多方面有很高的應用價值，本文對蒼耳愈傷組織的誘導、組織培養(yǎng)技術體系的建立、愈傷組織提取物對番茄灰霉病菌(BotrytiscinereaPers.)的抑菌活性等進行了

2、初步的探討研究，并用生長速率法、黃瓜子葉法對野生蒼耳、栽培蒼耳、組培蒼耳提取物的抑菌活性進行了比較分析，得出以下結論： 1.以蒼耳葉片、葉柄及莖段為外植體，在MS附加不同激素種類和濃度配比的培養(yǎng)基上對蒼耳愈傷組織進行誘導培養(yǎng)，并對獲得生長迅速、性狀好的愈傷組織培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基進行了系統(tǒng)研究。通過研究發(fā)現(xiàn)：對蒼耳莖段進行消毒處理時，0.1﹪升汞消毒5min為較理想的消毒處理；蒼耳愈傷組織在光照培養(yǎng)下生長快，性狀好；不同組合及濃度配

3、比的培養(yǎng)基對愈傷組織的誘導率存在顯著差異，蒼耳對2,4-D敏感，不宜用來誘導愈傷組織；MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L、MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L的激素組合是誘導愈傷組織的最佳培養(yǎng)基；葉片、莖段形成的愈傷組織性狀較好，出愈早，出愈率高，量多，愈傷為淺綠色，質地疏松，有生活力，是蒼耳愈傷組織誘導的最適外植體。 2.以野生蒼耳種子室內盆栽的植株帶腋芽莖段作為外植體進行組織培養(yǎng)技術的初步研究和

4、探索。通過研究發(fā)現(xiàn)：蒼耳帶腋芽莖段接種在不同激素配比的培養(yǎng)基中，其腋芽萌發(fā)率、萌動時間及芽體生長狀態(tài)均存在明顯差異，MS、MS+KT2.0mg/L為蒼耳腋芽誘導萌發(fā)的最佳培養(yǎng)基，誘導芽的效果最好。蒼耳莖段在MS+6BA1.0mg/L+GA32.0mg/L的培養(yǎng)基中增殖倍數(shù)較高，有利于叢生芽誘導，而且苗體生長健壯，為蒼耳叢生芽誘導較好的培養(yǎng)基。NAA使芽先愈傷化，抑制芽的增殖，不宜用來誘導叢生芽。適宜蒼耳壯苗及繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+6-

5、BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，在此培養(yǎng)基上，小芽健壯，生長速度快，莖段增粗，基部產生少量愈傷組織。在附加NAA0.5mg/L、KT2.0mg/L的MS培養(yǎng)基中生根率可達80﹪以上，根的生長狀態(tài)最好，呈淺綠色，數(shù)量多，可生長出旺盛的完整蒼耳再生植株。 3.利用生長速率法、孢子萌發(fā)法，研究了蒼耳愈傷組織丙酮提取物對番茄灰霉菌菌絲生長及形態(tài)、孢子形成及形態(tài)、孢子萌發(fā)的影響。結果表明：蒼耳愈傷組織丙酮提取物對番茄灰霉菌具有較

6、強的抑制作用，其抑制菌絲生長的EC50為20.27mg/mL；抑制孢子形成和萌發(fā)的EC50分別為9.58mg/mL和15.21mg/mL；顯微觀察可見菌絲體變細、節(jié)間拉長、分支增多，顏色變淺、胞內物質外滲、內含物減少；產孢極少，長勢弱；孢子芽管短小、畸形。 4.利用黃瓜子葉法，對野生蒼耳、栽培蒼耳、組培蒼耳提取物的抑菌活性進行了比較測定，對5種供試真菌的有效中量(EC50)和對番茄灰霉菌保護作用及治療作用的效果進行差異顯著性測驗