接骨木組織培養(yǎng)技術(shù)及抑菌活性的研究.pdf

1、接骨木是集觀賞、藥用、食用等多種價(jià)值為一體的木本植物,全株含有多種復(fù)雜的生物活性物質(zhì)。但其種子繁殖速度慢、出苗系數(shù)低,難以滿足其產(chǎn)業(yè)化需要,因此迫切需要加強(qiáng)組織培養(yǎng)技術(shù)的研究。同時(shí)由于接骨木中含有生物堿、黃酮等物質(zhì),其提取物在抑菌及殺蟲的應(yīng)用方面有很大的潛力,很有希望成為新型植物源農(nóng)藥。但目前接骨木在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中對植物病原菌和害蟲的作用研究甚少。本試驗(yàn)以接骨木和西洋接骨木為試驗(yàn)材料,對其組織培養(yǎng)快繁體系的建立、其提取物對黃瓜灰霉病菌的抑制

2、作用和活性物質(zhì)含量的測定進(jìn)行了研究,取得的主要成果如下:
　　1.建立了高效的接骨木離體快繁體系。
　　在10h光照時(shí)間下,MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L+GA32.0mg/L是誘導(dǎo)接骨木無菌莖尖與莖段生成腋芽的最佳培養(yǎng)基,誘導(dǎo)率分別是96.67％與100%;MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L+TDZ0.03mg/L+GA32.0mg/L是接骨木腋芽增殖的最佳培養(yǎng)基;生根的最佳培養(yǎng)基為MS

3、+NAA0.4mg/L+IBA0.2mg/L,生根率達(dá)100%,平均主根數(shù)目為16條。MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L+GA33.0mg/L是誘導(dǎo)西洋接骨木莖尖與莖段生成腋芽的最佳培養(yǎng)基,誘導(dǎo)率分別是96.67%與100%;增殖的最佳培養(yǎng)基與接骨木相同;生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3mg/L+IBA0.2mg/L。
　　2.研究了接骨木屬植物提取物在植物病原真菌方面的作用。
　　以生長速率法測定

4、了接骨木與西洋接骨木葉片5種不同極性溶劑(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇)提取物對黃瓜灰霉病菌菌絲生長的抑制作用。在順序提取方法中,接骨木乙醇提取物濃度為2000mg/L時(shí),對供試病菌表現(xiàn)出最大的抑制效果,抑制率達(dá)29.9222%;西洋接骨木的乙酸乙酯提取物濃度為2000mg/L,對供試病菌的最大抑制率為37.6694%。
　　3.測定了接骨木屬葉片中黃酮等生物活性物質(zhì)的含量,分析了黃酮及鹽酸小檗堿的含量與抑菌活性之間的關(guān)系。

5、
　　對接骨木與西洋接骨木不同時(shí)期的鮮葉及5種不同極性溶劑的提取物采用蒽酮比色法、考馬斯亮藍(lán)法、蘆丁比色法及鹽酸小檗堿比色法分別測定了可溶性糖、可溶性蛋白、總黃酮及鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果表明,以上4種活性物質(zhì)在接骨木與西洋接骨木不同時(shí)期的鮮葉中含量不同,其中接骨木在花前期可溶性蛋白和總黃酮的含量最高,分別為15.8700mg/g和12.7756mg/g,在盛花期可溶性糖和鹽酸小檗堿的含量最高,分別為22.3222mg/g和8.01

6、95mg/g;西洋接骨木在盛花期可溶性糖和總黃酮的含量最高,分別是21.3133mg/g和12.8082mg/g,在花后期可溶性蛋白和鹽酸小檗堿的含量最高,分別為14.7401mg/g和7.9035mg/g。接骨木與西洋接骨木成熟葉片的5種不同極性溶劑提取物中以上4種活性物質(zhì)含量也不同,在順序提取方法中,接骨木乙醇提取物中4種活性物質(zhì)的含量分別是256.7014mg/g、461.9506mg/g、78.8710mg/g、59.7799m

7、g/g,當(dāng)可溶性糖和可溶性蛋白總量與總黃酮和鹽酸小檗堿總量的比值為5.1832及提取物濃度為2000mg/L時(shí),對黃瓜灰霉病菌表現(xiàn)出最大抑制率;西洋接骨木的乙酸乙酯提取物中4種活性物質(zhì)的含量分別是86.4200mg/g、815.1607mg/g、55.8610mg/g、86.4200mg/g,當(dāng)可溶性糖和可溶性蛋白總量與總黃酮和鹽酸小檗堿總量的比值為6.3366及提取物濃度達(dá)2000mg/L時(shí),對黃瓜灰霉病菌表現(xiàn)出最大抑制率。因此兩種樹