用微衛(wèi)星技術(shù)對(duì)大足黑山羊進(jìn)行親權(quán)鑒定的研究.pdf

1、大足黑山羊是重慶市大足縣境內(nèi)一個(gè)具有優(yōu)良遺傳特性的山羊群體。該群體毛色純黑，體型較大，生長(zhǎng)發(fā)育快，產(chǎn)肉性能好，產(chǎn)仔率高，每只母羊每年繁殖率在350﹪～400﹪。目前正在對(duì)該山羊群體進(jìn)行品種選育工作，已在當(dāng)?shù)亟⒘吮７N選育場(chǎng)，組建了核心群，但購(gòu)入的這些羊只個(gè)體間的譜系不清，不利于選育工作的進(jìn)行。本實(shí)驗(yàn)就是用微衛(wèi)星DNA技術(shù)對(duì)核心群中的個(gè)體進(jìn)行親緣關(guān)系分析，為建立合理的選配制度提供參考，防止近親繁殖引起的品種退化，加快品種選育進(jìn)程。

2、 本實(shí)驗(yàn)用于研究的對(duì)象是黑山羊個(gè)體的基因組DNA。通過(guò)頸靜脈采血共獲得133個(gè)個(gè)體的血液樣本，其中104只為購(gòu)入的子代、11只為公羊、18只為被檢子代的母親，母親樣本已知的子代有24只，母親樣本未知的有80只。用苯酚－氯仿法提取基因組DNA，經(jīng)檢測(cè)，所提DNA達(dá)到本實(shí)驗(yàn)所需要的質(zhì)量要求。 實(shí)驗(yàn)選用的微衛(wèi)星位點(diǎn)通過(guò)Internet查詢(xún)數(shù)據(jù)庫(kù)等方式獲得，并根據(jù)微衛(wèi)星選擇標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，合成引物后，設(shè)置溫度梯度，調(diào)整鎂離子濃度等優(yōu)化PC

3、R擴(kuò)增條件，最后選擇確定了24個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行研究分析。本實(shí)驗(yàn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用非變性聚丙烯酰胺凝膠檢測(cè)并用硝酸銀染色顯跡，通過(guò)掃描獲得顯色后的凝膠電泳圖像，用凝膠分析軟件Bandscan根據(jù)與分子量標(biāo)準(zhǔn)pBR322DNA/MspIMarkers比照，讀取片斷大小，建立包括每個(gè)個(gè)體每個(gè)位點(diǎn)等位基因信息的基因型數(shù)據(jù)庫(kù)。 使用專(zhuān)用的親子鑒定軟件Cervus2.0，根據(jù)得到的基因型數(shù)據(jù)庫(kù)及已知的親緣關(guān)系記錄進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)量的計(jì)算和親權(quán)分析

4、。本實(shí)驗(yàn)中共24個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，其位點(diǎn)的平均等位基因數(shù)是9.87個(gè)(4-14)，等位基因最多的是BP28和BMS1248兩個(gè)位點(diǎn)，都為14個(gè)。等位基因最少的是位點(diǎn)ILSTS028，有4個(gè)，也達(dá)到了用微衛(wèi)星進(jìn)行親權(quán)鑒定所要求的個(gè)數(shù)。平均期望雜合度為0.837，而平均觀察雜合度為0.928，與實(shí)際觀察值有一定差距，其原因可能是該采樣群體受到一定外來(lái)因素或近交的影響。平均雜合度較高也表明了該黑山羊群體遺傳變異大，對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力強(qiáng)。平均多態(tài)信息

5、含量為0.812，其中PIC值最低的是位點(diǎn)MAF070為0.667，PIC值最高的是BMS1248為0.893，表明本實(shí)驗(yàn)所選擇的24個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)具有豐富的多態(tài)性，可提供較多的多態(tài)信息含量。 母子關(guān)系已知時(shí)，計(jì)算分析得到的排除概率為0.999976，母子關(guān)系未知時(shí)排除概率為0.999995。根據(jù)每個(gè)候選父親的LOD值及Delta標(biāo)準(zhǔn)，每個(gè)子代都鑒定到最可能父親，但其置信度水平各有差異。以父權(quán)為依據(jù)可將104個(gè)后代分成11個(gè)群體。

6、根據(jù)分群結(jié)果來(lái)看，屬于鐵山鎮(zhèn)公羊后代的平均個(gè)數(shù)最多，尤以050051和DT0015的后代為最多，這兩只公羊都是鐵山鎮(zhèn)西北村農(nóng)戶(hù)所養(yǎng)大公羊，這與購(gòu)買(mǎi)子代小羊時(shí)農(nóng)戶(hù)提供親緣相吻合，同時(shí)具有同胞關(guān)系的4號(hào)和6號(hào)，54號(hào)和56號(hào)及78號(hào)和80號(hào)其鑒定結(jié)果也與記錄相同。 綜上可以看出：(1)微衛(wèi)星位點(diǎn)多態(tài)性高，呈共顯性遺傳，且可以用常規(guī)的PCR和電泳技術(shù)進(jìn)行分析，檢測(cè)方便準(zhǔn)確，是畜禽繁殖育種中進(jìn)行家畜親權(quán)鑒定和個(gè)體識(shí)別的理想方法；(2)黑