MMP-2在聲門上型喉癌中的表達及與淋巴結轉移的關系.pdf

1、目的
　　 探討基質金屬蛋白酶-2在聲門上型喉癌中的表達及其與淋巴結轉移的關系。
　　 方法
　　 臨床病例資料收集:收集中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科2011年3月至2011年12月手術切除的聲門上型喉癌組織50例(經病理證實均為鱗狀細胞癌)。其中男性42例,女性8例;60歲以下患者24例,60歲以上(含60歲)患者26例;病理組織學分級(WHO1997),高分化34例,中低分化16例;臨床分期(UI

2、CC2002),Ⅰ-Ⅱ期23例,Ⅲ-Ⅳ期27例;T分期(T1+T2)28例,(T3+T4)22例;有淋巴結轉移23例,無淋巴結轉移27例(術后淋巴結標本采用透明淋巴結摘出連續(xù)切片法確定有無淋巴結轉移)。取癌旁組織(腫瘤遠端1cm以上經病理證實未發(fā)現(xiàn)癌細胞)15例。常規(guī)制蠟塊,4μm連續(xù)切片,備免疫組織化學實驗用。另取15例新鮮原發(fā)聲門上型喉癌組織及其配對癌旁組織(腫瘤遠端1cm以上經病理證實未發(fā)現(xiàn)癌細胞),術中切除后立即放入-70℃冰箱

3、保存,備蛋白免疫印跡實驗用。所有患者均為原發(fā),術前均未接受過放化療。本實驗經中國醫(yī)科大學倫理委員會審查,患者每次手術前均簽署知情同意書,符合相關倫理標準。
　　 免疫組織化學染色及結果判定:采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(Streptavidin-peroxidase,S-P法)檢測聲門上型喉癌及癌旁組織中MMP-2的表達及淋巴管密度值,用PBS代替一抗做陰性對照。結果判定:MMP-2染色主要定位在細胞漿內棕黃或棕褐色顆粒,

4、染色強度高于背景非特異性顏色為陽性細胞,先于低倍鏡下選擇陽性細胞最密集的5個視野,再用高倍鏡在每個視野觀察100個細胞,最后取5個視野中陽性細胞的平均百分數做為每張切片的結果,按照以下標準進行評分:陽性細胞小于10%為(-),陽性細胞在10%-25%為(+),陽性細胞數在25%-50%之間為(++),陽性細胞大于50%為(+++)。D2-40標記陽性的淋巴管為棕黃色管腔樣結構,先在低倍鏡下選擇淋巴管最豐富區(qū)域,即“熱區(qū)”,再在高倍鏡下計

5、數5個視野淋巴管數,取其平均值作為該切片LMVD值。
　　 蛋白免疫印跡與結果判定:收集組織(包括聲門上型喉癌組織及其配對癌旁組織),勻漿,離心,Bradford法測定蛋白質濃度。SDS-PAGE電泳,一抗4℃孵育過夜,與相應二抗室溫下孵育2小時,ECL發(fā)光。結果判定:對顯影結果進行掃描,每次檢測時都檢測β-actin,以各組MMP-2與β-actin灰度值的比例作為各組組織中MMP-2蛋白的相對含量,進行統(tǒng)計學分析。
　

6、　 結果
　　 MMP-2在聲門上型喉癌組織中的陽性表達率為78.0%,明顯高于癌旁組織的13-3%(P＜0.05);聲門上型喉癌組織中MMP-2表達的高低與淋巴結轉移、臨床分期密有相關性(P＜0.05),而與T分期、性別、年齡及腫瘤的分化程度無明顯的相關性(P＞0.05);蛋白免疫印跡示MMP-2在聲門上型喉癌中表達高于癌旁正常組織。LMVD在聲門上型喉癌組和癌旁對照組計數分別為12.32±2.22和5.63±1.67,在有

7、淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組計數分別為13.26±1.89和1.51±1.18(P＜0.05);MMP-2與LMVD呈正相關(rs=0.723.P＜0.01)。
　　 結論
　　 聲門上型喉癌組織中MMP-2蛋白的陽性表達率高于癌旁組織,有淋巴結轉移組MMP-2蛋白表達高于無淋巴結轉移組,提示MMP-2蛋白表達可能與聲門上型喉癌的淋巴結轉移密切相關。MMP-2蛋白表達與LMVD值呈正相關,提示MMP-2可能促進了脈管系統(tǒng)