大氣壓非平衡等離子體對牙齦卟啉單胞菌的作用及其生物安全性評價.pdf

1、背景和目的：
　　 臨床上治療牙周病和種植體周圍炎的方法很多且各有優(yōu)缺點，但目前為止沒有一種理想的治療方法，同時等離子體技術因其固有的優(yōu)勢而越來越受到研究者的關注，本課題組早期的研究也證實常溫大氣壓非平衡等離子體在治療口腔疾病上有很大的潛力，本課題研究目的即研究常溫大氣壓非平衡等離子體殺滅牙周優(yōu)勢致病菌效果及通過動物實驗和細胞試驗研究其生物安全性。
　　
　　 材料和方法：
　　 本課題利用千赫茲脈沖直

2、流電源驅(qū)動的常溫大氣壓非平衡等離子體，工作氣體為He氣或He＋O2（比例2：0.02），參數(shù)為10KHz,1600ns,8Kv。
　　 1、用不同工作氣體的等離子體處理培養(yǎng)皿上的牙周優(yōu)勢致病菌牙齦卟啉單胞菌（ATCC33277），觀察抑菌圈大小并利用透射電鏡觀察細菌表面形貌變化；處理蓋玻片上牙齦卟啉單胞菌生物膜，Dead\Live熒光染色后用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察殺滅細菌情況。
　　 2、用工作氣體為He＋O2的等離子

3、體處理兔頰粘膜和舌粘膜，處理當天及處理后觀察五天處死，通過臨床癥狀觀察和病理切片評分評價其對粘膜的刺激強度。
　　 3、選鼠成骨細胞系（MC3T3-E1）做為處理對象，模擬正常細胞或牙周手術中暴露在外的細胞生理環(huán)境，細胞處理前在細胞表面加一層DMEM液，用工作氣體為He＋O2的等離子體處理，以不加DMEM處理組或不做任何處理的空白對照組做為本實驗的對照組，通過MTT法、AO/EB熒光染色法和流式細胞儀法，觀察APNPs對成骨細胞

4、活性影響。
　　
　　 結(jié)果：
　　 1、等離子體殺滅PG實驗中，觀察到明顯的抑菌圈，透射電鏡觀察到PG細胞破裂、死亡，等離子體處理蓋玻片上的生物膜5min就可以在激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察到整個視野的生物膜中的細菌顯示黃色或紅色（細菌已死亡）。
　　 2、粘膜刺激反應實驗中，兔在用APNPs處理后處死前，臨床觀察并未有粘膜充血、紅腫、潰瘍和糜爛等病變癥狀，處死后病理切片觀察并評分，當天處死組為﹣0.8

5、3，飼養(yǎng)五天組為﹣0.67，粘膜刺激強度均為無。
　　 3、細胞試驗中，加DMEM后，APNPs處理0.5min、1.0min、1.5min，細胞相對增殖率為109.5％，103.2％,105.7％（P＞0.05），每兩組間無顯著性差異；加DMEM組和空白對照組活細胞所占百分比為96.56±2.60％，95.56±1.12％（P＞0.05），兩組無顯著性差異，AO/EB染色后，兩組細胞均顯示綠色熒光（為活細胞所發(fā)熒光）。