AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen轉染SHR心肌下調β1-AR表達對美托洛爾降壓療效的影響.pdf

1、目的：
　　探討SHR心肌β1-AR表達下調對美托洛爾降壓效應的影響。
　　方法：
　　1.病毒載體包裝及鑒定實驗:對本課題組前期成功構建及篩選出的pAAV-ZsGreen-ADRB1-shRNA重組質粒進行酶切及測序鑒定，采用三質粒共轉染法進行AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen重組腺相關病毒的包裝，并進行病毒純化、滴度測定及體外感染293細胞活性實驗。
　　2.SHR心肌轉染實驗:將36只SHR隨

2、機分為3組:AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen注射組、AAV9-CMV-ADRB1-ZsGreen注射組（陰性對照組）、假手術，每組12只。病毒載體采用心包腔注射法轉染SHR心肌，4周后處死大鼠，取心肌組織。采用Real-time RT-PCR法檢測各組SHR心肌組織中β1-AR基因mRNA表達;采用免疫組化、Western-blot法檢測β1-AR蛋白的表達。
　　3.美托洛爾干預實驗:上述3組SHR每組同時隨機分

3、為兩個亞組，每組6只，分別給予美托洛爾和生理鹽水灌胃。每周監(jiān)測SHR血壓水平變化，連續(xù)干預4周后比較各組SHR血壓變化情況。
　　結果：
　　1.病毒載體包裝及鑒定:(1)酶切及測序鑒定結果表明前期構建的pAAV-ZsGreen-ADRB1-shRNA重組質粒為正確克隆;(2)病毒滴度測定結果表明純化后的AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen滴度達1.5×1012vg/mL;(3)病毒載體感染293細胞效率可達95

4、％以上。
　　2.SHR心肌轉染的效應:(1) Real-time RT-PCR結果顯示，AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen注射后β1-AR mRNA表達明顯低于陰性對照組(0.4142±0.3399 vs.1.0933±0.5853，P＜0.05);(2)免疫組化結果顯示，AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen注射后β1-AR蛋白表達明顯低于陰性對照組及假手術組（50.02±4.44 vs.80.05±3

5、.72 vs.79.30±2.79，P＜0.05）;(3)Western blot結果顯示，AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen注射后β1-AR蛋白表達明顯低于陰性對照組(0.5156±0.1199 vs.0.8333±0.1728, P＜0.05)。
　　3.SHR心肌β1-AR表達下調對血壓及美托洛爾療效的影響:干預4周后，(1) AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen+美托洛爾組、陰性對照+美托洛爾組、

6、假手術+美托洛爾組收縮壓明顯低于陰性對照+生理鹽水組、假手術+生理鹽水組（174.8±3.9mmHg vs.168.3±5.3mmHg vs.167.2±5.1mmHg vs.199.4±3.1mmHg vs.198.3±4.5mmHg,P＜0.05）;(2) AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen+生理鹽水組收縮壓明顯低于假手術+生理鹽水組（178.1±6.3mmHg vs.198.3±4.5mmHg，P＜0.05）;(3)

7、 AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen+美托洛爾組收縮壓降低幅度明顯低于陰性對照組+美托洛爾組和假手術+美托洛爾組(22.84±1.72mmHg vs.28.78±2.72mmHg vs.30.16±5.71mmHg, P＜0.05);(4)AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen+美托洛爾組與AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen+生理鹽水組降壓幅度比較無顯著性差異(22.84±1.72mmHgvs.18