FHIT基因在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景和目的:該實驗通過RT-PCR方法檢測FHIT基因在62例膀胱移行細(xì)胞癌和35例正常膀胱組織中表達(dá)情況,同時用免疫組織化學(xué)法檢測FHIT蛋白和增殖核抗原的表達(dá)狀況,進(jìn)一步探討FHIT基因在膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展中的作用,以及FHIT蛋白與腫瘤增殖核抗原之間的關(guān)系.材料與方法:收集2002年9月至2003年11月鄭州大學(xué)一附院泌尿外科膀胱1癌開放手術(shù)、經(jīng)尿道電切(TURBT)手術(shù)及活檢標(biāo)本共62例,同時獲得部分病人正常膀胱組織35例

2、.所有病人經(jīng)病理證實為膀胱移行細(xì)胞癌,術(shù)前均未行放療、化療及免疫治療.其中男46例,女16例,年齡29歲~78歲,平均62.5歲.每一例標(biāo)本取兩份,一份于10分鐘內(nèi)放入液氮中凍存,后移至-80℃冰箱;另一份用10﹪福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片4μm厚.腫瘤分期按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn),分為表淺性腫瘤T<,is>~T<,1>組37例,浸潤性腫瘤T<,2>~T<,4>組25例.病理分級按WHO方案:Ⅰ級9例,Ⅱ級18例,Ⅲ級35例,有

3、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的8例.利用RT-PCR方法檢測上述組織FHIT基因mRNA表達(dá)情況,即FHITmRNA異常表達(dá)與FHIT蛋白和腫瘤增殖核抗原之間的關(guān)系.通過用兔抗人FHIT多克隆抗體及鼠抗人PCNA單克隆抗體,采用通用型二步免疫組化染色法,檢測FHIT蛋白及PCNA抗原在62例BTCC組織及35例正常膀胱組織中的表達(dá)狀況.FHIT蛋白的評判標(biāo)準(zhǔn):按FHIT蛋白的分布陽性強(qiáng)度和陽性率.先按細(xì)胞染色強(qiáng)度評分:染色強(qiáng)度與背景著色相對比,無色為零分

4、;淺黃色為1分;棕黃色為2分;棕褐色為3分.再按陽性細(xì)胞所占百分比評分:陰性為0分;陽性細(xì)胞數(shù)≤10﹪為1分;陽性細(xì)胞數(shù)11﹪~50﹪為2分;陽性細(xì)胞數(shù)51﹪~75﹪為3分;陽性細(xì)胞數(shù)>75﹪為4分.染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比的成積≥2分為免疫反應(yīng)(+).比較同一標(biāo)本癌組織和正常組織的FHIT蛋白表達(dá)狀況.同時進(jìn)行FHIT蛋白陽性細(xì)胞和PCNA的陽性細(xì)胞計數(shù).PCNA以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性(染色的內(nèi)皮細(xì)胞不記入).隨機(jī)計數(shù)10個高倍

5、視野約1000個癌細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)取平均值作為PCNA增殖指數(shù).統(tǒng)計分析采用SPSS10.0軟件對資料進(jìn)行處理,應(yīng)用卡方檢驗和方差分析及Spearman相關(guān)性分析,以α=0.05作為差別具有統(tǒng)計學(xué)意義的檢驗標(biāo)準(zhǔn).結(jié)論:1.FHIT基因及FHIT蛋白在正常膀胱組織中的表達(dá)明顯高于BTCC組織,且隨著腫瘤浸潤深度增加和病理分級的增高,表達(dá)逐漸減少,表明FHIT基因的減少可能與腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān),FHIT基因的缺失可能使BTCC具有更強(qiáng)的侵襲