多聚化程度對可溶性鈣網(wǎng)蛋白免疫生物學(xué)功能的影響.pdf

1、鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin,CRT)是存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(Endoplasmic Reticulum,ER)中的鈣結(jié)合蛋白，可維持細(xì)胞鈣離子穩(wěn)態(tài)，并可作為分子伴侶輔助糖蛋白正確折疊。近年來研究還發(fā)現(xiàn)，CRT不僅僅是停留在ER當(dāng)中，還能定位到細(xì)胞膜。
　　此外，CRT還可以可溶性的形式釋放到細(xì)胞外，本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)自身免疫病患者血清中可檢測到CRT，并且重組的CRT具超強(qiáng)免疫刺激活性，并且rCRT多聚體比rCRT單體的免疫刺激活性

2、要強(qiáng)一百倍。對CRT功能片段進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn) rCRT/150-230可形成依賴于二硫鍵的多聚體，是具有超強(qiáng)免疫刺激活性的最小片段。本課題利用基因工程技術(shù)對rCRT/150-230的Cys163進(jìn)行突變，發(fā)現(xiàn)rCRT/150-230C163A不能形成依賴于二硫鍵的多聚體，并且體外不能刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放TNF-a以及小鼠脾細(xì)胞的增殖，體內(nèi)也不具有免疫原性。CRT全長具有三個半胱氨酸位點(diǎn)，進(jìn)一步對rCRT的三個半胱氨酸位點(diǎn)分別突變以及組

3、合突變，發(fā)現(xiàn)rCRT的多聚化并不依賴于半胱氨酸所形成的二硫鍵，并且突變前后rCRT免疫刺激活性沒有顯著變化。rCRT/39-272同時具有三個半胱氨酸，可形成規(guī)則的二聚體、四聚體和寡聚體，提示其多聚化可能依賴于分子間二硫鍵。但是與rCRT類似，半胱氨酸位點(diǎn)的突變同樣不影響rCRT的多聚化以及免疫刺激活性。
　　我們由此得出結(jié)論，多聚化程度高的rCRT/150-230WT比單體rCRT/150-230C163A具有更強(qiáng)的免疫生物學(xué)功