仙人掌果多糖抗腫瘤藥效和機(jī)制的研究.pdf

1、中草藥及其活性成分抗腫瘤的作用研究，成為現(xiàn)代藥物開發(fā)的熱點(diǎn)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，一些中草藥的多糖成分具有良好的抑制腫瘤生長和提高機(jī)體免疫功能的作用。國外最新研究資料表明，仙人掌果實(shí)的果漿能抑制宮頸癌、卵巢癌和膀胱癌細(xì)胞的增殖，而且能抑制患有卵巢癌大鼠的腫瘤生長。 目的：本研究旨在探討仙人掌果多糖體外及體內(nèi)的抗腫瘤作用。 方法： 1.仙人掌果多糖(CPFP)體外抗腫瘤研究： ①以CPFP提取物為實(shí)驗(yàn)對象，以人肝癌H

2、EPG-2株、人卵巢癌SKOV3株、人肝癌HCC-LM3株、人胃癌SGC7901株、人肝正常LO2株為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株，應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞的增殖活性。 ②流式細(xì)胞術(shù)定量檢測細(xì)胞凋亡率③RT-PCR檢測P53mRNA的表達(dá)④蛋白質(zhì)印跡檢測P53蛋白表達(dá) 2.CPFP體內(nèi)抗腫瘤研究： ①建立S180荷瘤小鼠移植性腫瘤模型，隨機(jī)分組、給藥。 ②連續(xù)給藥10天后處死S180荷瘤小鼠，取瘤塊，檢測分析CPFP對各組荷瘤

3、小鼠的腫瘤抑瘤率 ③摘取S180荷瘤小鼠胸腺和脾臟，計(jì)算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)；制備脾淋巴細(xì)胞懸液，用Con A刺激脾淋巴細(xì)胞增殖，MTT法檢測脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能 ④用比色法檢測超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。 ⑤透射電鏡觀察腫瘤組織超微結(jié)構(gòu)變化的影響。⑥HE染色觀察瘤組織病理學(xué)改變及免疫組化法觀察Bax、P53、VEGF蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

4、 ①CPFP對人體卵巢癌SKOV-3、胃癌7901、肝癌HEPG-2、肝癌LM3細(xì)胞的抑制作用較弱，對人正常肝細(xì)胞LO2毒副作用小。5-FU對人正常肝細(xì)胞LO2抑制作用明顯。 ②流式細(xì)胞術(shù)檢測LM3細(xì)胞凋亡率可知：生理鹽水組的凋亡率為8.76％；CPFP(0.625mg/ml)組凋亡率為18.77％； CPFP(2.500mg/ml)組凋亡率為34.12％。 ③RT-PCR結(jié)果可以得出：隨CPFP劑量的增加，P53 m

5、RNA的表達(dá)下調(diào)。 ④Western blot結(jié)果可以得出：隨CPFP劑量的增加，P53蛋白的表達(dá)減弱。 2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果： ①CPFP低、中、高劑量組及環(huán)磷酰胺(CTX)組的抑瘤率分別是：7.78％、31.13％、48.70％、61.07％。CPFP高、中劑量組抑瘤率高于30％。 ②CPFP各劑量組胸腺指數(shù)較生理鹽水組有所增高，其中高、中劑量組有顯著差異(P<0.05)；各劑量組脾臟指數(shù)較生理鹽水組無顯

6、著性差異(P>0.05)；CPFP能促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖，高劑量組、中劑量組與生理鹽水比較有顯著性差異(P<0.01) ③CPFP能降低血漿MDA、NO含量，升高SOD含量，高劑量、中劑量組與生理鹽水組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01) ④電鏡觀察顯示：CPFP作用后的腫瘤細(xì)胞間隙增大，核內(nèi)染色質(zhì)邊集，核仁濃縮或碎裂，胞質(zhì)內(nèi)線粒體空泡變性，線粒體嵴融合呈早期凋亡跡象。 ⑤HE染色可見CPFP藥物組瘤組織

7、有病理學(xué)改變，高劑量組瘤組織壞死較嚴(yán)重。CPFP能升高瘤組織中Bax蛋白表達(dá)，高、中劑量組與生理鹽水組相比較有顯著性差異(P<0.05)；CPFP能降低瘤組織中P53蛋白表達(dá)，高中低劑量組與生理鹽水組相比較均有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)；CPFP能降低瘤組織中VEGF蛋白表達(dá)，高、中劑量組與生理鹽水組比較有顯著性差異((P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論：CPFP具有一定的抗腫瘤作用，其機(jī)制可能與改善免疫功能、清