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文檔簡介
1、目的:研究MicroRNAs在子宮內膜異位癥患者在位內膜及正常子宮內膜中的表達情況,探索可直接靶向于Meis13’UTR區(qū)并且調控其表達的miRNAs,及其對子宮內膜間質細胞增殖和凋亡的影響。
方法:運用qRT-PCR法檢測預測的可能靶向于Meis13’UTR區(qū)的miRNAs在子宮內膜異位癥患者異位內膜(35例)及正常子宮內膜(35例)中的表達情況,挑選出后續(xù)用于靶向驗證的miRNA;通過400目濾網(wǎng)分離得到子宮內膜間質細胞;
2、用Lipo2000將miR-155模擬物、抑制劑和無關序列轉染到子宮內膜間質細胞中并將其分為三組:miR-155 mimics組、miR-155 inhibitor組及Negative control組,分別運用qRT-PCR及Western Blotting檢測Meis1 mRNA水平及蛋白水平的表達變化;構建雙熒光素酶報告分析載體psi-CHECK2-Meis13’UTR及定向點突變載體psi-CHECK2-Meis13’UTR-m
3、u檢測miR-155對Meis13’UTR區(qū)的直接靶向調控作用;運用CCK8法檢測各組子宮內膜間質細胞增殖的變化,流式細胞儀檢測各組子宮內膜間質細胞凋亡。
結果:(1)qRT-PCR結果顯示,miRNAs在子宮內膜異位癥中的表達存在差異,miR-21, miR23a, miR23b, miR145于EMs異位內膜中的表達水平低于在正常子宮內膜中的表達(P<0.05),miR-155于EMs異位內膜中的表達水平明顯高于在正常子宮
4、內膜中的表達(P<0.05)。(2)miR-155在轉錄后水平調控Meis1的表達。(3)miR-155通過直接靶向于Meis1的3’UTR區(qū)來發(fā)揮調控作用。(4)上調miR-155可促進子宮內膜間質細胞的增殖,抑制其凋亡;而下調miR-155則抑制子宮內膜間質細胞增殖,促進其凋亡(P<0.05)。
結論:miRNAs參與子宮內膜異位癥的發(fā)病,miR-155通過直接靶向于Meis1的3’UTR區(qū)在轉錄后水平調控Meis1的表達
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