子宮內(nèi)膜異位癥組織中HIF-1α及MIF的表達及意義.pdf

1、第一部分缺氧誘導因子1α及巨噬細胞移動抑制因子在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達
　　 目的：檢測缺氧誘導因子-1α及巨噬細胞移動抑制因子在子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜組織、異位內(nèi)膜組織及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達，分析在位內(nèi)膜組織中HIF-1α及MIF的表達與不同的月經(jīng)周期之間的關系，探討HIF-1α及MIF在內(nèi)異癥患者異位內(nèi)膜組織及在位內(nèi)膜組織中的表達與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病之間的關系。
　　 方法：應用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應方法檢測

2、HIF-1α及MIF mRNA在15例正常子宮內(nèi)膜組織、15例子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜組織及40例異位內(nèi)膜組織中的表達；采用免疫組化方法及Western blot方法檢測HIF-1α及MIF蛋白水平的表達。
　　 結果：(1)正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜組織及異位內(nèi)膜組織中均表達HIF-1α mRNA及MIF mRNA。HIF-1α擴增片段長度為159bp，MIF擴增片段長度為127bp。以HIF-1α mRNA與內(nèi)參

3、β-actin mRNA的光密度比值表示HIF-1α mRNA水平，以MIF mRNA與內(nèi)參β-actin mRNA的光密度比值表示MIF mRNA水平。結果正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜組織及異位內(nèi)膜組織中HIF-1αmRNA分別為0.47±0.19、0.62±0.18、0.87±0.17，異位內(nèi)膜組織中HIF-1αmRNA明顯高于在位內(nèi)膜組織及正常子宮內(nèi)膜組織，而內(nèi)異癥在位內(nèi)膜組織中的HIF-1α mRNA亦明顯高于正常子

4、宮內(nèi)膜組織，Q檢驗兩兩比較發(fā)現(xiàn)各組之間的差異均具有統(tǒng)計學意義；正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜組織及異位內(nèi)膜組織中MIF mRNA分別為0.40±0.16、0.63±0.22、0.92±0.21，異位內(nèi)膜組織中MIF mRNA明顯高于在位內(nèi)膜組織及正常子宮內(nèi)膜組織，而內(nèi)異癥在位內(nèi)膜組織中的MIF mRNA亦明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，Q檢驗兩兩比較發(fā)現(xiàn)各組之間的差異均具有統(tǒng)計學意義。
　　 (2)免疫組化結果顯示HIF-1

5、α的陽性染色呈棕黃色，主要定位于內(nèi)膜組織中的腺上皮細胞，少量的散在于間質(zhì)中的細胞也呈現(xiàn)陽性染色。MIF的陽性染色亦為棕黃色，也主要定位于腺上皮細胞，少量的散在于間質(zhì)中的細胞也呈現(xiàn)陽性染色。Western-Blot進一步分析HIF-1α及MIF蛋白水平的表達，結果正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜組織及異位內(nèi)膜組織中均表達這兩種蛋白。分別以HIF-1α與β-actin的灰度比值及MIF與β-actin的灰度比值表示HIF-1α及MI

6、F的蛋白表達水平。結果正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜組織及異位內(nèi)膜組織中HIF-1α蛋白分別為0.35±0.13、0.45±0.12、0.81±0.21，異位內(nèi)膜組織中HIF-1α蛋白明顯高于異位癥在位內(nèi)膜組織，t檢驗差異有統(tǒng)計學意義，內(nèi)異癥在位內(nèi)膜組織中的HIF-1α蛋白明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，t'檢驗差異具有統(tǒng)計學意義；正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜組織及異位內(nèi)膜組織中MIF蛋白分別為0.46±0.11、0.6

7、6±0.12、0.98±0.32，異位內(nèi)膜組織中MIF蛋白明顯高于在位內(nèi)膜組織，t檢驗差異具有統(tǒng)計學意義，而異位癥在位內(nèi)膜組織中的MIF蛋白亦明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，t'檢驗差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 在HIF-1α蛋白及MIF蛋白表達與月經(jīng)周期之間的關系方面：正常增殖期子宮內(nèi)膜組織中HIF-1α及MIF均略高于分泌期子宮內(nèi)膜組織；子宮內(nèi)膜異位癥增殖期在位內(nèi)膜組織中HIF-1α蛋白略低于分泌期在位內(nèi)膜組織；異位癥增殖期在位內(nèi)膜

8、組織中MIF蛋白略高于分泌期在位內(nèi)膜組織但是差異均無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：初步研究結果提示HIF-1α及MIF在子宮內(nèi)膜異位癥患者中表達增高，可能與內(nèi)異癥發(fā)病有關；增殖期MIF的表達量略高于分泌期，提示在增殖期MIF可能對異位內(nèi)膜促進生長作用更明顯。
　　 第二部分缺氧誘導因子-1α及巨噬細胞移動抑制因子的表達與子宮內(nèi)膜異位癥患者不孕及臨床分期的關系
　　 目的：探討缺氧誘導因子-1α及巨噬細胞移動抑制因子在

9、異位子宮內(nèi)膜組織中的表達，分析伴有不孕者異位內(nèi)膜組織中HIF-1α和MIF表達在不孕機制中的作用，探討HIF-1α和MIF表達與子宮內(nèi)膜異位癥臨床分期之關系。
　　 方法：應用實時熒光定量PCR方法檢測HIF-1αmRNA和MIFmRNA在15例正常子宮內(nèi)膜組織及40例異位內(nèi)膜組織中的表達；采用Western-Blot方法檢測HIF-1α和MIF蛋白水平的表達。按照臨床分期及不孕分組比較HIF-1α和MIF的表達情況。其中40例

10、子宮內(nèi)膜異位癥患者中有9例合并不孕。
　　 結果：
　　 一、缺氧誘導因子-1α的表達與不孕的關系
　　 1、HIF-1α mRNA水平的表達與不孕的關系
　　 實時熒光定量PCR測得子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織及正常子宮內(nèi)膜組織中均表達HIF-1αmRNA。伴有不孕的異位癥患者異位內(nèi)膜組織中HIF-1αmRNA的相對定量為6.482±1.144；不伴有不孕的異位癥患者異位內(nèi)膜組織中HIF-1αmRNA

11、的相對定量為3.006±1.129；正常子宮內(nèi)膜組織中HIF-1α mRNA的相對定量為0.450±0.115。伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織中HIF-1α mRNA水平明顯高于不伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織，t'檢驗比較兩組差異有統(tǒng)計學意義；不伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織中HIF-1α mRNA水平明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，t'檢驗比較兩組差異有統(tǒng)計學意義。
　　 2、HIF-1α蛋白水平的表達與不孕的關系
　　

12、Western blot分析子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織及正常子宮內(nèi)膜組織中均表達HIF-1α蛋白。伴有不孕的異位癥患者異位內(nèi)膜組織中HIF-1α蛋白的相對定量為1.034±0.182；不伴有不孕的異位癥患者異位內(nèi)膜組織中HIF-1α蛋白的相對定量為0.751±0.177；正常子宮內(nèi)膜組織中HIF-1α蛋白的相對定量為0.348±0.116。伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織中HIF-1α蛋白水平明顯高于不伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織，

13、t檢驗比較兩組差異有統(tǒng)計學意義；不伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織中HIF-1α蛋白水平明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，t檢驗比較兩組差異有統(tǒng)計學意義。
　　 3、HIF-1α表達與子宮內(nèi)膜異位癥臨床分期的關系
　　 本研究中以不同臨床分期劃分組別，測得Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期EM患者異位內(nèi)膜組織中HIF-1α mRNA的相對定量分別為3.758±2.022，3.770±2.000，3.842±1.562；HIF-1α蛋白的相對定量

14、分別為0.955±0.190，0.812±0.209，0.729±0.203。各組之間HIF-1α mRNA的表達差別不明顯，F(xiàn)檢驗各組間差異無統(tǒng)計學意義；各組之間HIF-1α蛋白的表達差別也不明顯，F(xiàn)檢驗各組間差異無統(tǒng)計學意義。
　　 二、巨噬細胞移動抑制因子的表達與不孕的關系
　　 1、MIFmRNA水平的表達與不孕的關系
　　 實時熒光定量PCR測得子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織及正常子宮內(nèi)膜組織中均表達M

15、IFmRNA。伴有不孕的異位癥患者異位內(nèi)膜組織中MIF mRNA的相對定量為8.261±2.757；不伴有不孕的異位癥患者異位內(nèi)膜組織中MIFmRNA的相對定量為3.399±0.754；正常子宮內(nèi)膜組織中MIF mRNA的相對定量為0.134±0.070。伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織中MIF mRNA水平明顯高于不伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織，t'檢驗比較兩組差異有統(tǒng)計學意義；不伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織中MIF mRNA水平明

16、顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，t'檢驗比較兩組差異有統(tǒng)計學意義。
　　 2、MIF蛋白水平的表達與不孕的關系
　　 Western blot分析子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織及正常子宮內(nèi)膜組織中均表達MIF蛋白。伴有不孕的異位癥患者異位內(nèi)膜組織中MIF蛋白的相對定量為1.397±0.315；不伴有不孕的異位癥患者異位內(nèi)膜組織中MIF蛋白的相對定量為0.861±0.197；正常子宮內(nèi)膜組織中MIF蛋白的相對定量為0.448±0.

17、154。伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織中MIF蛋白水平明顯高于不伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織，t檢驗比較兩組差異有統(tǒng)計學意義；不伴有不孕的EM患者異位內(nèi)膜組織中MIF蛋白水平明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，t檢驗比較兩組差異有統(tǒng)計學意義。
　　 3、MIF的表達與子宮內(nèi)膜異位癥臨床分期的關系
　　 本研究中以不同臨床分期劃分組別，測得Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期異位癥患者異位內(nèi)膜組織中MIF mRNA的相對定量分別為4.671±2.

18、396，4.569±2.648，4.228±2.446；MIF蛋白的相對定量分別為1.158±0.258，0.973±0.344，0.887±0.278。各組之間MIF mRNA的表達差別不明顯，F(xiàn)檢驗各組間差異無統(tǒng)計學意義；各組之間MIF蛋白的表達差別不明顯，F(xiàn)檢驗各組間差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：HIF-1α和MIF的高表達與子宮內(nèi)膜異位癥患者所致不孕有關。HIF-1α和MIF的表達與子宮內(nèi)膜異位癥臨床分期無關。