非酒精性脂肪肝病大鼠肝臟SOCS-3的表達(dá)和羅格列酮干預(yù)研究.pdf

1、背景：非酒精性脂肪肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一類肝組織學(xué)改變與酒精性脂肪肝病相似但無(wú)過(guò)量飲酒史的臨床病理綜合癥，包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎和脂肪性肝硬化三種主要類型。隨著生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，NAFLD已經(jīng)成為我國(guó)最常見(jiàn)的肝病之一。NAFLD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，但與胰島素抵抗相關(guān)已經(jīng)被大量研究證實(shí)，肝臟脂肪沉積被視作是胰島素抵抗綜合癥的一個(gè)重要組成部分。細(xì)胞因子

2、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制物(Supressors of cytokine signaling,SOCS)是一類具有抑制Janus類激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化子(Janus kinases-signall transducers and activators of transcription，JAK-STAT)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的蛋白，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn) SOCS-3參與了胰島素抵抗及NAFLD發(fā)病過(guò)程，但SOCS-3的作用機(jī)制尚未完全清楚。本實(shí)驗(yàn)以高脂飼料建立

3、NAFLD大鼠模型，觀察大鼠肝組織SOCS-3表達(dá)，并以胰島素增敏劑羅格列酮分別進(jìn)行早期及晚期干預(yù)，觀察羅格列酮對(duì)SOCS-3表達(dá)的影響，為NAFLD的早期防治提供一個(gè)新的治療靶點(diǎn)。 目的：研究NAFLD大鼠肝組織SOCS-3的表達(dá)狀況，探討SOCS-3在非酒精性脂肪肝病發(fā)病中的作用。研究羅格列酮對(duì)NAFLD的治療作用及其對(duì)SOCS-3基因表達(dá)的影響，探討其作用機(jī)制。 方法：37只雄性SD大鼠，正常喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為3

4、組：(1)正常對(duì)照組8只，飼以普通飼料，以生理鹽水灌胃：(2)羅格列酮早期干預(yù)組8只，飼以高脂飼料，同時(shí)予以羅格列酮灌胃給藥；(3)NAFLD組21只，飼以高脂飼料。8周后處死5只，取肝臟進(jìn)行病理學(xué)檢查證實(shí)造模成功后，將余下的16只大鼠隨機(jī)分為兩組：羅格列酮晚期干預(yù)組8只，繼續(xù)飼以高脂飼料，并以羅格列酮灌胃給藥；NAFLD組8只，繼續(xù)飼以高脂飼料，并以生理鹽水灌胃。16周末，處死所有大鼠，檢測(cè)體重、肝指數(shù)(肝重/體重)、血清甘油三酯(T

5、C)、血清總膽固醇(TC)、血糖(FBG)、血胰島素(FINS)、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、肝組織切片行HE染色于光鏡下觀察肝臟病理學(xué)改變，并采用RT-PCR法檢測(cè)肝臟SOCS-3mRNA和SREBP-1cmRNA表達(dá)。 結(jié)果： 1、各組大鼠體重、肝指數(shù)結(jié)果NAFLD組大鼠體重顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組體重均低于NAFLD對(duì)照組(P<0.05)、與正常對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>

6、0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 NAFLD組大鼠肝指數(shù)顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)；早期干預(yù)組與正常對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；晚期干預(yù)組肝指數(shù)較正常對(duì)照組高(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組肝指數(shù)均低于NAFLD對(duì)照組(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2、各組大鼠血甘油三酯、總膽固醇檢測(cè)結(jié)果NAFLD組血清

7、TG顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)；早期干預(yù)組與正常對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；晚期干預(yù)組TG較正常對(duì)照組高(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組血清TG顯著低于NAFLD組(P<0.05)；且早期干預(yù)組血清TG顯著低于晚期干預(yù)組(P<0.05)。 NAFLD組血清TC顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)；早期干預(yù)組與晚期干預(yù)組TC較正常對(duì)照組高(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組血清TC顯著低于NAFLD組(P<

8、0.05)；且早期干預(yù)組血清TC顯著低于晚期干預(yù)組(P<0.05、)。 3、各組大鼠空腹血糖、血胰島素、胰島素抵抗指數(shù)結(jié)果NAFLD組FBG顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05、)；早期干預(yù)組與正常對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；晚期干預(yù)組FBG較正常對(duì)照組高(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組FBG顯著低于NAFLD組(P<0.05)；且早期干預(yù)組血清FBG顯著低于晚期干預(yù)組(P<0.05)。 NAFLD組F

9、INS顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組FINS與正常對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組FINS顯著低于NAFLD組(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 NAFLD組血清HOMA-IR顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)；早期干預(yù)組與正常對(duì)照組問(wèn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；晚期干預(yù)組HOMA-IR較正常對(duì)照組高(P<0.05)；

10、早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組HOMA-IR顯著低于NAFLD組(P<0.05)；且早期干預(yù)組血清TG顯著低于晚期干預(yù)組(P<0.05)。 4、各組大鼠肝臟病理學(xué)改變及肝脂變分級(jí)NAFLD組肝組織切片在光鏡下可見(jiàn)以大泡性脂滴為主，伴有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及點(diǎn)片狀壞死。與NAFLD對(duì)照組相比，羅格列酮早期干預(yù)組及晚期干預(yù)組肝臟光鏡下見(jiàn)少量肝細(xì)胞呈脂肪變，無(wú)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與NAFLD組比較，羅格列酮早期干預(yù)組及晚期干預(yù)組肝臟光鏡下脂肪變性分

11、級(jí)顯著減輕(P<0.05)，早期干預(yù)組脂肪變性程度較晚期干預(yù)組輕(P<0.05)。 5、各組大鼠肝組織SOCS-3和SREBP-1c mRNA表達(dá)水平正常對(duì)照組肝組織僅有少量SOCS-3mRNA表達(dá)；NAFLD組肝組織SOCS．3表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增強(qiáng)(P<0.05)；早期干預(yù)組SOCS-3表達(dá)與正常對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；晚期干預(yù)組SOCS．3表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增強(qiáng)(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組

12、SOCS-3表達(dá)較NAFLD組明顯下調(diào)(P<0.05)，早期干預(yù)組明顯低于晚期干預(yù)組(P<0.05)。 正常對(duì)照組肝組織僅有少量SREBP-1cmRNA表達(dá)；NAFLD組肝組織SREBP-1c表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增強(qiáng)(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組SREBP-1c表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增強(qiáng)(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組SREBP-1c表達(dá)較NAFLD組明顯下調(diào)(P<0.05)，早期干預(yù)組明顯低于晚期干預(yù)組(P<0

13、.05)。 6、各組大鼠肝組織SOCS-3mRNA表達(dá)水平與胰島素抵抗、SREBP-1c mRNA表達(dá)水平、肝脂肪變的相關(guān)分析通過(guò)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，SOCS-3mRNA相對(duì)表達(dá)水平與胰島素抵抗指數(shù)、SREBP-1c mRNA相對(duì)表達(dá)水平、肝脂肪變程度成顯著正相關(guān)(r分別為0.665、0.811、0.831，P<0.05)。 結(jié)論： 1、SOCS-3可能通過(guò)促進(jìn)胰島素抵抗及上調(diào)肝組織SREBP-1c表達(dá)參與NAFLD發(fā)