非酒精性脂肪肝病大鼠肝臟SOCS-3的表達和羅格列酮干預(yù)研究.pdf

1、背景：非酒精性脂肪肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一類肝組織學改變與酒精性脂肪肝病相似但無過量飲酒史的臨床病理綜合癥，包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎和脂肪性肝硬化三種主要類型。隨著生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，NAFLD已經(jīng)成為我國最常見的肝病之一。NAFLD的發(fā)病機制尚未完全明確，但與胰島素抵抗相關(guān)已經(jīng)被大量研究證實，肝臟脂肪沉積被視作是胰島素抵抗綜合癥的一個重要組成部分。細胞因子

2、信號轉(zhuǎn)導抑制物(Supressors of cytokine signaling,SOCS)是一類具有抑制Janus類激酶-信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄活化子(Janus kinases-signall transducers and activators of transcription，JAK-STAT)信號轉(zhuǎn)導通路的蛋白，近年來研究發(fā)現(xiàn) SOCS-3參與了胰島素抵抗及NAFLD發(fā)病過程，但SOCS-3的作用機制尚未完全清楚。本實驗以高脂飼料建立

3、NAFLD大鼠模型，觀察大鼠肝組織SOCS-3表達，并以胰島素增敏劑羅格列酮分別進行早期及晚期干預(yù)，觀察羅格列酮對SOCS-3表達的影響，為NAFLD的早期防治提供一個新的治療靶點。 目的：研究NAFLD大鼠肝組織SOCS-3的表達狀況，探討SOCS-3在非酒精性脂肪肝病發(fā)病中的作用。研究羅格列酮對NAFLD的治療作用及其對SOCS-3基因表達的影響，探討其作用機制。 方法：37只雄性SD大鼠，正常喂養(yǎng)1周后，隨機分為3

4、組：(1)正常對照組8只，飼以普通飼料，以生理鹽水灌胃：(2)羅格列酮早期干預(yù)組8只，飼以高脂飼料，同時予以羅格列酮灌胃給藥；(3)NAFLD組21只，飼以高脂飼料。8周后處死5只，取肝臟進行病理學檢查證實造模成功后，將余下的16只大鼠隨機分為兩組：羅格列酮晚期干預(yù)組8只，繼續(xù)飼以高脂飼料，并以羅格列酮灌胃給藥；NAFLD組8只，繼續(xù)飼以高脂飼料，并以生理鹽水灌胃。16周末，處死所有大鼠，檢測體重、肝指數(shù)(肝重/體重)、血清甘油三酯(T

5、C)、血清總膽固醇(TC)、血糖(FBG)、血胰島素(FINS)、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、肝組織切片行HE染色于光鏡下觀察肝臟病理學改變，并采用RT-PCR法檢測肝臟SOCS-3mRNA和SREBP-1cmRNA表達。 結(jié)果： 1、各組大鼠體重、肝指數(shù)結(jié)果NAFLD組大鼠體重顯著高于正常對照組(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組體重均低于NAFLD對照組(P<0.05)、與正常對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>

6、0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 NAFLD組大鼠肝指數(shù)顯著高于正常對照組(P<0.05)；早期干預(yù)組與正常對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；晚期干預(yù)組肝指數(shù)較正常對照組高(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組肝指數(shù)均低于NAFLD對照組(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 2、各組大鼠血甘油三酯、總膽固醇檢測結(jié)果NAFLD組血清

7、TG顯著高于正常對照組(P<0.05)；早期干預(yù)組與正常對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；晚期干預(yù)組TG較正常對照組高(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組血清TG顯著低于NAFLD組(P<0.05)；且早期干預(yù)組血清TG顯著低于晚期干預(yù)組(P<0.05)。 NAFLD組血清TC顯著高于正常對照組(P<0.05)；早期干預(yù)組與晚期干預(yù)組TC較正常對照組高(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組血清TC顯著低于NAFLD組(P<

8、0.05)；且早期干預(yù)組血清TC顯著低于晚期干預(yù)組(P<0.05、)。 3、各組大鼠空腹血糖、血胰島素、胰島素抵抗指數(shù)結(jié)果NAFLD組FBG顯著高于正常對照組(P<0.05、)；早期干預(yù)組與正常對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；晚期干預(yù)組FBG較正常對照組高(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組FBG顯著低于NAFLD組(P<0.05)；且早期干預(yù)組血清FBG顯著低于晚期干預(yù)組(P<0.05)。 NAFLD組F

9、INS顯著高于正常對照組(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組FINS與正常對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組FINS顯著低于NAFLD組(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 NAFLD組血清HOMA-IR顯著高于正常對照組(P<0.05)；早期干預(yù)組與正常對照組問差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；晚期干預(yù)組HOMA-IR較正常對照組高(P<0.05)；

10、早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組HOMA-IR顯著低于NAFLD組(P<0.05)；且早期干預(yù)組血清TG顯著低于晚期干預(yù)組(P<0.05)。 4、各組大鼠肝臟病理學改變及肝脂變分級NAFLD組肝組織切片在光鏡下可見以大泡性脂滴為主，伴有大量炎性細胞浸潤及點片狀壞死。與NAFLD對照組相比，羅格列酮早期干預(yù)組及晚期干預(yù)組肝臟光鏡下見少量肝細胞呈脂肪變，無明顯炎性細胞浸潤。與NAFLD組比較，羅格列酮早期干預(yù)組及晚期干預(yù)組肝臟光鏡下脂肪變性分

11、級顯著減輕(P<0.05)，早期干預(yù)組脂肪變性程度較晚期干預(yù)組輕(P<0.05)。 5、各組大鼠肝組織SOCS-3和SREBP-1c mRNA表達水平正常對照組肝組織僅有少量SOCS-3mRNA表達；NAFLD組肝組織SOCS．3表達較正常對照組顯著增強(P<0.05)；早期干預(yù)組SOCS-3表達與正常對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；晚期干預(yù)組SOCS．3表達較正常對照組顯著增強(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組

12、SOCS-3表達較NAFLD組明顯下調(diào)(P<0.05)，早期干預(yù)組明顯低于晚期干預(yù)組(P<0.05)。 正常對照組肝組織僅有少量SREBP-1cmRNA表達；NAFLD組肝組織SREBP-1c表達較正常對照組顯著增強(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組SREBP-1c表達較正常對照組顯著增強(P<0.05)；早期干預(yù)組和晚期干預(yù)組SREBP-1c表達較NAFLD組明顯下調(diào)(P<0.05)，早期干預(yù)組明顯低于晚期干預(yù)組(P<0

13、.05)。 6、各組大鼠肝組織SOCS-3mRNA表達水平與胰島素抵抗、SREBP-1c mRNA表達水平、肝脂肪變的相關(guān)分析通過相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，SOCS-3mRNA相對表達水平與胰島素抵抗指數(shù)、SREBP-1c mRNA相對表達水平、肝脂肪變程度成顯著正相關(guān)(r分別為0.665、0.811、0.831，P<0.05)。 結(jié)論： 1、SOCS-3可能通過促進胰島素抵抗及上調(diào)肝組織SREBP-1c表達參與NAFLD發(fā)