GRIM-19及其靶基因STAT-3在乳腺癌組織中的表達及意義.pdf

1、背景：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。據(jù)美國癌癥學會數(shù)據(jù)統(tǒng)計，2008年全球有1383500名婦女患乳腺癌，死亡病例數(shù)為458400。其在婦女惡性腫瘤的發(fā)生中占23％，在惡性腫瘤導致婦女死亡的病例中占14％，成為導致婦女死亡的首要原因。近年來，乳腺癌在全球的發(fā)病率呈上升趨勢，中國成為乳腺癌發(fā)病率增長最快的國家之一。乳腺癌病因復雜，大量研究相繼發(fā)現(xiàn)與之相關(guān)的因素因子，但確切發(fā)病機制并未解明。干擾素/維甲酸合并誘導的細胞凋亡基因( gen

2、e associated with retinoid-IFN-induced mortality，GRIM)是最近發(fā)現(xiàn)的一群參與干擾素(IFN)和維甲酸(RA)合并誘導的細胞凋亡基因，其中GRIM-19基因在多種正常組織中表達，參與IFN/RA誘導的腫瘤細胞凋亡，推測它很可能是抑癌基因。該基因參與細胞增殖、凋亡的調(diào)控過程，其表達的降低或位點的突變可導致細胞的異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化。而轉(zhuǎn)錄信號轉(zhuǎn)導子與激活子-3(signal stransdu

3、cer and activator of sranscription， STAT-3)在乳腺癌中持續(xù)性活化，表達水平明顯增強，具有促進腫瘤細胞增殖、抑制腫瘤細胞凋亡、促進侵襲轉(zhuǎn)移及免疫逃逸等重要作用。GRIM-19則被認為是STAT-3表達和激活的負性調(diào)節(jié)因子。本研究旨在分析兩種基因在乳腺良性疾病組織及乳腺癌組織中表達的差異，探討兩種基因表達的相關(guān)性及其臨床意義。
　　 方法：收集濟南市中心醫(yī)院2008年5月-2010年4月行手

4、術(shù)切除的乳腺癌標本64例作為乳癌組，其中“非三陰性”乳腺癌54例，“三陰性”乳腺癌10例。同時收集同期乳腺增生及腺瘤組織標本30例作為對照組。臨床分期根據(jù)UICC（1997年）標準。采用常規(guī)免疫組織化學染色SP法，通過統(tǒng)計學進行數(shù)據(jù)分析。常規(guī)甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片；脫蠟水化，3％過氧化氫浸泡10min，微波修復（GRIM-19采用pH6.0檸檬酸，STAT-3采用pH8.0EDTA），中高火10min，中低火10min，

5、冷卻至室溫；滴加血清封閉，37℃孵育30min，后滴加一抗，37℃孵育90min，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗后滴加生物素標記的二抗，37℃孵育20min，沖洗，滴加辣根過氧化酶標記的三抗，37℃孵育30min，沖洗后DAB顯色，復染封片。陽性對照采用試劑說明標記組織，陰性對照用PBS代替一抗。
　　 試劑一抗選用Abcam公司鼠抗人多克隆抗體GRIM-19(ab88094)、鼠抗人單克隆抗體STAT-3(ab32500)、SP試

6、劑盒以及二硝基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑購自福州邁新公司。陽性對照采用試劑說明標記組織，陰性對照用PBS代替一抗。免疫組化陽性標準，根據(jù)組織細胞中陽性細胞所占比例以及染色深度進行綜合評分。陽性細胞所占比例為隨機選取5個視野，分別計數(shù)100個細胞（圖1）。陽性細胞≤10％記為0分，10％～25％為1分，＞25％～50％為2分，＞50％～100％為3分。染色深度：無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。兩個評分標準的乘積作為該標本

7、的積分，≤2分為陰性，＞2分為陽性。
　　 結(jié)果：
　　 1． GRIM-19蛋白在乳癌組中的陽性表達率為29.7％(19/64)，明顯低于良性對照組中的83.3％(25/30)表達率，兩組間差別有顯著性(p＜0.01)；STAT-3蛋白在乳癌組中的陽性表達率為85.9％(55/64)，明顯高于對照組的10.0％(3/30)表達率，差別有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。
　　 2． GRIM-19在“三陰性”乳腺癌中

8、的表達顯著低于在非“三陰性”乳腺癌中的表達(p＜0.05)；而在不同年齡、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人表皮生長因子受體(HER-2/neu)的組間表達無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。STAT-3在各臨床病理指標中的表達均無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1． GRIM-19在乳腺癌中的表達降低，其表達的缺失可誘導乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展。
　　 2．乳腺癌中GRIM