Ghrelin對VEGF、Flt-1在正常妊娠和妊高癥胎盤中的表達調節(jié)研究.pdf

1、內蒙古農(nóng)業(yè)大學博士學位論文Ghrelin對VEGF、Flt1在正常妊娠和妊高癥胎盤中的表達調節(jié)研究姓名：姜麗萍申請學位級別：博士專業(yè)：基礎獸醫(yī)學指導教師：曹貴方吳巖20090401為了探討NO釋放量及NOS活力在正常妊娠各期的變化規(guī)律，其變化規(guī)律與Ghrelin、VEGF的變化是否有關，采用硝酸鹽還原酶法檢測了NO、NOS在正常妊娠各期的釋放水平的變化，結果提示：NO釋放含量及NOS活力在正常妊娠各期呈現(xiàn)規(guī)律性變化，即在妊娠早期910周

2、，妊娠1620周、妊娠3138周出現(xiàn)三次高峰，提示：NO和NOS釋放量與Ghrelin、VEGF、Flt1的表達有相關性，而孕晚期高峰的出現(xiàn)可能與分娩啟動與子宮平滑肌松弛有關，可能由其他的調節(jié)機制影響。3反義抑帛lJGhrelin對VEGF、Fit1蛋白及mRNA表達以及NO、NOS釋放水平的影響為了進一步驗證Ghrelin、VEGF、Fit1在胎盤血管形成發(fā)育過程中相互作用機制，利用反義寡核苷酸技術反義抑錆J]Ghrelin轉錄，從細

3、胞水平檢測Ghrel锨寸體外培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞(Humanumbilicalveinendothelialcells，HUVEC)中VEGF及其受體Fit1蛋白及mRNA表達以及NO、NOS釋放水平的影響，通過改變體外培養(yǎng)的反義寡核苷酸濃度和培養(yǎng)的不同時間確定最佳抑帶1]Ghrelin條件為：濃度20umol／L、培養(yǎng)時間：36h。有效抑制Ghrelin轉錄，檢測GhreliI測‘HUvEC中VEGF、Fit1蛋白和mRNA表達的影

4、響。結果顯示：反義抑制Ghrelin后VEGF、Flt1蛋白和mRNA的表達均下降，與空白對照組和SCON組比較均有顯著性差異(pO05)；NO釋放量與NOS活力在反義抑帶lJGhrelin后釋放水平也顯著下降(p005)。體外研究證明，反義抑制mⅣECGhrelin后可下調VEGF，F(xiàn)it1蛋白和mRNA的表達，同時下調NO釋放量和NOS活力水平。4在以上實驗的基礎上，為探討Ghrelin在PIH孕婦發(fā)病過程中的作用，聯(lián)合采用免疫組化

5、法、RQPCR、硝酸鹽還原酶法技術檢測了Ghrelin、VEGF、Flt1及NO、NOS在正常孕婦與PIH孕婦胎盤的表達情況。結果證實：PIH孕婦胎盤組織中Ghrelin，VEGF、Flt1蛋白和mRNA水平下降與正常孕婦比較有顯著性差異(pO05)；提示在PIH發(fā)病過程中Ghrelin可能對VEGF，F(xiàn)it1蛋白和mRNA的表達具有下調作用，進而影響胎盤血管網(wǎng)的形成和發(fā)育；NO含量與NOS活力水平在PIH孕婦胎盤組織中下降，提示Ghr

6、eIin可能通過下調VEGF的表達進一步影響血管舒張因子NO水平下降，進而引起胎盤血管痙攣，血壓升高，最終導致PIH的發(fā)生。‘綜合以上分析，本研究利用免疫組化、實時熒光定量PCR、細胞培養(yǎng)、反義寡核苷酸、硝酸鹽還原酶技術檢測了Ghrelin、VEGF、Fit1及NO、NOS在正常妊娠與PIH孕婦胎盤以及反義抑NGhrelin體外培養(yǎng)HUVEC中的表達情況，研究結果充分表明：Ghrelin與VEGF、Fit1及NO、NOS在正常妊娠各階段