泡球蚴永久性保存方法及其保存后生物活性的研究.pdf

1、目的：觀察繼發(fā)性泡球蚴整鼠經(jīng)液氮凍存后傳代健康小鼠，被接種小鼠體內(nèi)泡球蚴的生長情況及其生物活性，以探討泡球蚴保種傳代的新方法。 方法：從繼發(fā)性泡球蚴小鼠腹腔中取出透亮泡球蚴的包囊組織，先吸出囊液3ml，包囊用無菌眼科剪剪碎，無菌紗網(wǎng)過濾除去不均勻組織塊后與囊液混合，以青霉素及鏈霉素溶液混合稀釋，使最終形成25％泡球蚴組織混懸液。青霉素濃度為800U/ml，鏈霉素濃度為500U/ml。最后加入地塞米松3滴。選取健康小鼠25只，消毒

2、后腹腔注射0.5ml/只，作為本次研究對照組。另取繼發(fā)性泡球蚴小鼠處死后密封并置液氮罐液相中凍存一周后取出，迅速解凍，自小鼠腹腔取出泡球蚴包囊組織，按前述方法配制懸液并接種健康小鼠20只，作為本次研究試驗(yàn)組。兩組小鼠分別飼養(yǎng)兩個月后處死，剖檢并從以下方面評價(jià)凍存效果：(1)大體觀察及泡球蚴包囊濕重的測量；(2)普通光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡觀察組織學(xué)結(jié)構(gòu)及超微結(jié)構(gòu)；(3)從免疫學(xué)方面檢測包囊囊液中的蛋白含量及血清中免疫球蛋白的含量；(4)檢

3、測小鼠血清堿性磷酸酶及囊液中鈣離子含量等生化指標(biāo)；(5)免疫組織化學(xué)觀察IL-2Rα在泡球蚴組織中的有無及其分布情況。綜合以上各方面，比較兩組小鼠所接種泡球蚴有無差異。 結(jié)果：生長兩個月后剖檢，發(fā)現(xiàn)液氮低溫凍存后泡球蚴所接種試驗(yàn)組小鼠與常規(guī)接種組小鼠均成功感染泡球蚴。模型對照組小鼠泡球蚴包囊濕重為1.6013±0.8819g，試驗(yàn)組小鼠泡球蚴包囊濕重為1.2000±0.7391g，兩組間包囊濕重比較發(fā)現(xiàn)結(jié)果無顯著性差異(P＞0.

4、05)；病理組織及超微結(jié)構(gòu)觀察和處理發(fā)現(xiàn)模型對照組與試驗(yàn)組泡球蚴囊壁組織和細(xì)胞結(jié)構(gòu)均正常且無明顯差異；兩組小鼠泡球蚴囊液中蛋白總量分別為模型對照組1.2489±0.5085g/L，試驗(yàn)組為1.2365±0.2730g/L，兩組相比差異無顯著性(P＞0.05)；兩組小鼠血清中抗泡球蚴特異性免疫球蛋白測定結(jié)果表明其含量的差異無顯著性(P＞0.05)，且其陽性率經(jīng)比較亦無顯著性差異(P＞0.05)；囊液中鈣離子含量比較差異無顯著性(P＞0.0