脂聯(lián)素及其受體在各型慢性乙型肝炎患者肝組織的表達(dá)和意義.pdf

1、目的:乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染呈世界性流行,每年約有100萬(wàn)人死于HBV感染所致的肝硬化、肝衰竭和肝細(xì)胞癌。研究發(fā)現(xiàn),在急、慢性HBV感染過(guò)程中,都存在以促炎和抗炎細(xì)胞因子失衡為特征的炎癥損傷過(guò)程。脂聯(lián)素是近年發(fā)現(xiàn)的一類具有保護(hù)作用的脂肪細(xì)胞因子,其主要作用為調(diào)節(jié)能量代謝、提高胰島素的敏感性、抗炎和抗肝纖維化作用。研究證實(shí)非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholicSteatohepatitis,

2、NASH)患者血清脂聯(lián)素水平降低,并與肝臟炎癥壞死、脂肪變和纖維化相關(guān)。但脂聯(lián)素與慢性HBV感染的關(guān)系,及其對(duì)慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)預(yù)后、轉(zhuǎn)歸影響尚無(wú)確切報(bào)道。
　　 本研究通過(guò)檢測(cè)各型慢性乙型肝炎患者血清脂聯(lián)素水平,結(jié)合肝組織脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體2 mRNA和蛋白的表達(dá),以探討脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2在各型慢性乙型肝炎發(fā)病過(guò)程中的變化特點(diǎn)及臨床意義。
　　 方法:收集2009年01月-

3、2010年12月我院門診和住院CHB(中度)、乙型肝炎肝硬化(Liver Cirrhosis,LC)、慢性重型乙型肝炎(Chronic SevereHepatitis B,CSHB)患者各20例。診斷均符合2005年中國(guó)《慢性乙型肝炎防治指南》和2006年中國(guó)《肝衰竭診療指南》標(biāo)準(zhǔn)。選擇同時(shí)期本院正常健康體檢者20名做為血清學(xué)健康對(duì)照。
　　 應(yīng)用全自動(dòng)化分析儀檢測(cè)患者門診首日或入院次日空腹血糖(FastingBlood Glu

4、cose,FBG)、血清膽固醇(Cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、白蛋白(Albumin)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、總膽紅素(Total Bilirubin,TBiL)、凝血酶原活動(dòng)度(ProthrombinActivity,PTA)水平;酶聯(lián)免疫法檢測(cè)HBV血清學(xué)標(biāo)志物:HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb;定量PCR

5、分析檢測(cè)血清HBVDNA載量。檢測(cè)抗-HAV、抗-HCV、抗-HEV、抗-HIV,以除外其他嗜肝病毒及HIV感染。
　　 應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked ImmunosorbentAssay,ELISA)檢測(cè)血清脂聯(lián)素水平,嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
　　 HE染色觀察肝組織普通病理變化,Masson三重染色觀察肝組織纖維化程度。采用Power Vision TM二步法對(duì)肝組織進(jìn)行脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受

6、體2免疫組織化學(xué)染色,棕黃色著色為陽(yáng)性表達(dá),用多功能病理圖象分析儀測(cè)定脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2表達(dá)面積百分比,每張片子取中央和四周五個(gè)區(qū)域,20倍物鏡下計(jì)算平均面密度(陽(yáng)性面積與統(tǒng)計(jì)場(chǎng)面積百分比)。
　　 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)檢測(cè)肝組織脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2 mRNA的表達(dá)。
　　 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)

7、據(jù)進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組患者人口學(xué)與生化學(xué)指標(biāo)的比較
　　 三組不同類型的慢性乙型肝炎患者在年齡、性別構(gòu)成比、體重指數(shù)(Body Mass Index,BMI)、TC、TG均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。與正常對(duì)照組相比,CHB組、LC組和CSHB組患者血清ALT、TBiL漸次升高,白蛋白、PTA逐漸下降,尤其以CSHB組變化顯著。
　　 2.各組患者血清脂聯(lián)素水平的變化
　　

8、CSHB組(0.821±0.149)和LC組(0.718±0.090)均較正常對(duì)照組(0.587±0.147)血清脂聯(lián)素水平明顯升高,F=13.296,P＜0.05。CHB組(0.616±0.126)與正常對(duì)照組(0.587±0.147)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.肝組織普通病理學(xué)的變化
　　 正常對(duì)照組HE染色顯示:肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心呈放射狀排列,細(xì)胞形態(tài)正常,肝板結(jié)構(gòu)完整。Masson染色

9、:肝竇、中央靜脈周圍及匯管區(qū)未見(jiàn)纖維組織沉積;CHB患者HE染色顯示:小葉內(nèi)可見(jiàn)點(diǎn)灶狀肝細(xì)胞變性、壞死,壞死灶及肝竇內(nèi)以淋巴細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),匯管區(qū)擴(kuò)大,部分界板損傷。Masson染色可見(jiàn):擴(kuò)大匯管區(qū)內(nèi)輕重不等的纖維組織沉積;LC患者HE染色突出表現(xiàn)為:肝板排列紊亂,假小葉形成。匯管區(qū)大小不一,可伴有程度不等的炎細(xì)胞浸潤(rùn)及界面炎。Masson染色顯示:纖維間隔彼此交叉、連接,分割包繞正常肝細(xì)胞形成假小葉結(jié)構(gòu);CSHB患者HE染色表

10、現(xiàn)為:肝細(xì)胞大塊、亞大塊狀壞死,壞死區(qū)細(xì)胞結(jié)構(gòu)脫失,伴大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),部分壞死區(qū)可見(jiàn)殘存和/或再生肝細(xì)胞島,小膽管增生,可見(jiàn)膽栓。Masson染色顯示:小葉結(jié)構(gòu)紊亂不清,壞死區(qū)內(nèi)纖維支架塌陷,周圍組織可見(jiàn)大量膠原纖維增生。
　　 4.肝組織脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2 mRNA表達(dá)的變化
　　 與正常對(duì)照組(0.091±0.018)(0.075±0.016)相比,三組不同類型的慢性乙型肝炎患者脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2 mRNA表達(dá)

11、均明顯升高,且以CHB0.123±0.019)(0.106±0.018)組、LC(0.196±0.017)(0.167±0.016)組、CSHB(0.245±0.028)(0.223±0.020)組順序依次遞增,各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。F值分別為45.675和63.386,P值均小于0.05。
　　 5.肝組織脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2蛋白表達(dá)部位與強(qiáng)弱的變化
　　 正常肝組織僅可見(jiàn)少量脂聯(lián)素表達(dá)于肝細(xì)胞漿,隨著CHB向

12、LC、CSHB進(jìn)展,脂聯(lián)素表達(dá)逐漸增多。對(duì)比觀察脂聯(lián)素表達(dá)部位發(fā)現(xiàn),CHB和LC組,脂聯(lián)素主要表達(dá)在肝細(xì)胞胞漿。CSHB患者脂聯(lián)素主要表達(dá)在肝竇間質(zhì)細(xì)胞,在肝細(xì)胞少量表達(dá)。肝組織脂聯(lián)素受體2表達(dá)量特點(diǎn)與脂聯(lián)素變化一致,但表達(dá)部位均在肝細(xì)胞漿。對(duì)正常對(duì)照組(4.044±0.815)(2.804±0.622)、CHB組(5.545±0.613)(4.775±0.458)、LC組(6.553±0.614)(5.678±0.539)和CSHB組

13、(8.482±0.772)(7.654±0.272)脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2蛋白表達(dá)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測(cè),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。F值分別為45.675和63.386,P值均小于0.05。
　　 6.相關(guān)性分析
　　 CHB組肝組織脂聯(lián)素mRNA和蛋白水平與肝臟炎癥評(píng)分正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為r=0.745、r=0.891,P值均小于0.05。CSHB組:肝組織脂聯(lián)素mRN,A和蛋白水平與ALT正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為r=0.702、r=0.58

14、3,P值均小于0.05。與白蛋白負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)為,r=-0.683、r=-0.641,P值均小于0.05。
　　 CHB、LC和CSHB患者血清脂聯(lián)素水平、肝組織脂聯(lián)素mRNA和蛋白表達(dá)水平與血清HBVDNA水平均無(wú)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為r=-0.094、r=-0.131、r=-0.014、r=-0.254、r=-0.349、r=0.380、r=0.189、r=-0.302、r=-0.195,P值均大于0.05。
　　

15、結(jié)論:
　　 1.血清脂聯(lián)素水平在CHB組、LC組和CSHB組患者順序依次升高,提示血清脂聯(lián)素水平可以作為一個(gè)肝病嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)指標(biāo)。
　　 2.肝組織脂聯(lián)素mRNA和蛋白水平與CHB患者肝臟炎癥評(píng)分、LC患者肝臟纖維化評(píng)分和CSHB患者血清ALT水平均為正相關(guān),與CSHB患者白蛋白負(fù)相關(guān),提示脂聯(lián)素在各型慢性乙型肝炎疾病進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
　　 3.脂聯(lián)素在正常肝細(xì)胞胞漿少量表達(dá);CHB和LC患者,脂聯(lián)素