肝組織HBVcccDNA定量檢測(cè)在慢性乙型肝炎患者治療觀察中作用的研究.pdf

1、目的： 乙型肝炎病毒(HBV)的分子生物學(xué)研究表明，共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)對(duì)HBV感染的建立及HBV復(fù)制具有非常重要的意義，在慢性乙型肝炎HBV感染狀態(tài)持續(xù)存在，抗病毒治療停止后病情反復(fù)及HBV耐藥等方面，cccDNA發(fā)揮了關(guān)鍵作用。目前人們對(duì)HBVcccDNA的研究大多來(lái)自動(dòng)物模型和細(xì)胞模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主要有東方土撥鼠、鴨和轉(zhuǎn)基因小鼠。對(duì)人體內(nèi)HBVcccDNA的了解非常少，目前國(guó)內(nèi)沒(méi)有慢性乙型肝炎患者肝組織HBVc

2、ccDNA定量研究在治療觀察中的作用的報(bào)道。 本課題應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)方法檢測(cè)慢性乙型肝炎(CHB)患者肝組織HBVcccDNA定量，研究肝組織HBVcccDNA定量與肝組織及血清HBVDNA定量、HBsAg滴度、肝組織損害程度及肝組織病理的關(guān)系，探討HBVcccDNA在慢性乙型肝炎各個(gè)時(shí)期的分布特點(diǎn)，研究肝組織HBVcccDNA的動(dòng)力學(xué)變化、肝組織HBVcccDNA的定量研究在慢性乙型肝炎診斷和治療中的意

3、義，為慢性乙型肝炎臨床診斷和治療提供可靠依據(jù)。 方法： 患者共96例，其中85例慢性乙型肝炎患者均來(lái)自山東省立醫(yī)院2005年5月～2006年10月住院病人，男65例，女20例，年齡21～54歲，平均32歲。所有患者診斷均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)2000年9月西安聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》[15]，并排除甲、丙、丁、戊型肝炎和其他原因所致肝損害。所有病例院外半年內(nèi)未行抗病毒治療，根據(jù)HBeAg

4、和抗-HBe的情況，分為HBeAg陽(yáng)性的慢性乙型肝炎和HBeAg陰性的慢性乙型肝炎兩組，兩組資料在年齡、性別、病程等方面均具有可比性。非乙肝患者11例，包括：丙肝2例，自身免疫性肝炎1例，脂肪肝4例，酒精性脂肪肝2例，不明原因肝損害2例作為對(duì)照。應(yīng)用lightcycler熒光PCR檢測(cè)儀檢測(cè)肝組織HBVcccDNA定量與肝組織及血清HBVDNA定量，美國(guó)BECKMANCX9全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑分別檢測(cè)ALB、ALT、AST、GGT

5、、ALP、TBIL、DBIL等肝功能指標(biāo)，以ALT、TBIL為代表進(jìn)行分析，Roche公司ECL2010全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)HBsAg滴度，進(jìn)行肝組織炎癥活動(dòng)度(G)分級(jí)及肝組織纖維化程度(S)分期等，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1．85例慢性乙型肝炎患者肝組織均檢測(cè)到HBVcccDNA，定量為1.45x10<'3>拷貝/mg～3.14x10<'6>拷貝/mg(對(duì)數(shù)值：4.54±1.32)；肝組織HBVDNA，定

6、量為3.21x10<'4>拷貝/mg～2.35x10<'7>拷貝/mg(對(duì)數(shù)值：4.90±1.33)；血清HBVDNA，定量為3.92x10<'4>拷貝/ml～5.53x10<'8>拷貝/ml(對(duì)數(shù)值：5.10±1.34)。 2．肝組織HBVcccDNA定量與肝組織、血清HBVDNA定量的相關(guān)性：肝組織HBVcccDNA定量與肝組織HBVDNA定量呈高度相關(guān)(對(duì)數(shù)值：4.54±1.32與4.90±1.33，r=0.738，p<0

7、.001)；肝組織HBVcccDNA定量與血清HBVDNA定量也正相關(guān)(對(duì)數(shù)值：4.54±1.32與5.10±1.34，r=0.436，p<0.005)。 3．肝組織HBVcccDNA定量與血清HBsAg滴度的關(guān)系：血清HBsAg滴度平均值769±211.32COI。肝組織HBVcccDNA定量與血清HBsAg滴度呈正相關(guān)(r=0.721，p<0.005)。 4．HBeAg陽(yáng)性的慢性乙型肝炎和HBeAg陰性的慢性乙型肝炎

8、患者肝組織HBVcccDNA定量、肝組織HBVDNA定量和血清HBVDNA定量結(jié)果見(jiàn)表1，HBeAg陽(yáng)性組肝組織HBVcccDNA定量、肝組織HBVDNA定量和血清HBVDNA定量均高于HBeAg陰性組，兩者各項(xiàng)結(jié)果之間比較均有顯著性差異(p

9、性乙型肝炎和HBeAg陰性的慢性乙型肝炎患者之間ALT、TBIL、PT均無(wú)顯著差異(p>0.05)說(shuō)明肝組織HBVcccDNA與肝功能檢測(cè)結(jié)果無(wú)相關(guān)性，不能反映肝組織實(shí)質(zhì)損害的程度。 6．肝組織HBVcccI)NA定量與肝組織病理的關(guān)系：肝組織HBVcccDNA定量與肝組織炎癥活動(dòng)度(G)及肝組織纖維化程度(S)的關(guān)系，見(jiàn)表3。85例慢性乙型肝炎患者肝組織HBVcccDNA定量10<'3>拷貝/mg～10<'6>拷貝/mg之間。

10、肝組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，炎癥活動(dòng)度1～3，纖維化程度0～3。兩者無(wú)明顯相關(guān)性，說(shuō)明肝組織HBVcccDNA定量與肝組織炎癥及纖維化程度無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系。 7．其中45例HBeAg陽(yáng)性病人應(yīng)用拉米夫定治療48周后，再次接受各種檢查。發(fā)現(xiàn)18例HBeAg轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)陰率為42﹪，27例HBeAg陽(yáng)性病人檢查結(jié)果未發(fā)生變化。治療前后血清HBeAg與肝組織：HBVcccDNA、肝組織HBVDNA、血清HBVDNA的關(guān)系見(jiàn)附表4。治療前后血清

11、HBeAg與血清學(xué)指標(biāo)的關(guān)系附表5。 結(jié)論： 1.肝組織HBVcccDNA定量水平準(zhǔn)確，直接反映了體內(nèi)HBV存在和復(fù)制狀態(tài)，與目前臨床指標(biāo)血清HBVDNA定量、HBeAg相比較，更加可靠靈敏。特別在血清HBVDNA定量低于檢測(cè)水平以下時(shí)，是評(píng)價(jià)：HBV復(fù)制、感染持續(xù)、臨床藥物抗HBV療效或臨床痊愈的最重要指標(biāo)。 2.慢性乙型肝炎(CHB)患者肝組織的HBVcccDNA與血清HBVDNA定量呈正相關(guān)，在臨床工作中動(dòng)

12、態(tài)檢測(cè)慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA定量，在一定程度上能反映肝組織HBV的復(fù)制程度，幫助了解肝組織的。HBVcccDNA定量的變化，作為抗病毒治療的適應(yīng)癥選擇和臨床療效判斷的依據(jù)。但慢性乙型肝炎(CHB)患者血清HBVDNA定量的水平和肝組織的HBVcccDNA相關(guān)性不太強(qiáng)，血清HBVDNA定量的水平與肝組織HBV的復(fù)制程度并非平行變化，有時(shí)不能真實(shí)反映肝組織HBV感染及HBVDNA復(fù)制情況，不能通過(guò)血清HBVDNA定量推測(cè)肝組織的H

13、BVcccDNA定量的水平，特別在血清HBVDNA定量低于檢測(cè)水平以下時(shí)，肝組織HBVDNA仍可維持一定水平。 3.肝組織HBVcccDNA定量與血清HBsAg滴度相關(guān)性較強(qiáng)，血清HBsAg滴度可在一定程度上反應(yīng)肝組織HBVcccDNA定量的狀況。但在隱匿性HBV感染診斷，仍需采用檢測(cè)肝組織HBVcccDNA定量來(lái)明確診斷。 4.HBeAg陽(yáng)性患者組肝組織HBVcccDNA定量、肝組織HBVDNA定量和血清HBVDNA定

14、量均高于HBeAg陰性患者組。說(shuō)明HBeAg也是病毒在體內(nèi)復(fù)制的指標(biāo)之一?？笻Be陽(yáng)性表示病毒復(fù)制減弱，傳染性降低，但抗HBe陽(yáng)性的病例肝組織仍可發(fā)現(xiàn)HBVcccDNA、HBVDNA。具有較強(qiáng)傳染性和較高的病毒復(fù)制，肝損害持續(xù)存在，仍具有慢性化進(jìn)展傾向。 5.慢性乙型肝炎(CHB)患者肝組織HBVcccDNA定量在病理炎癥分級(jí)(G)和纖維化分期(S)的各組間均無(wú)顯著性差異，與肝實(shí)質(zhì)損害程度無(wú)關(guān)，肝組織HBVcccDNA定量不能預(yù)

15、測(cè)CHB肝組織病變程度。細(xì)胞因子引起非細(xì)胞溶解機(jī)制在清除肝組織HBVcccDNA中起部分作用。 6.在應(yīng)用拉米夫定治療48周后，拉米夫定對(duì)肝組織HBVcccDNA無(wú)任何作用；對(duì)肝組織HBVDNA及血清HBVDNA抑制作用較強(qiáng)；在應(yīng)用拉米夫定治療48周后，肝組織HBVcccDNA仍可維持一定水平(特別在血清HBVDNA定量低于檢測(cè)水平以下時(shí))，說(shuō)明血清HBVDNA定量水平與肝組織HBV的復(fù)制程度并非平行變化，不能真實(shí)反映肝組織HB

16、V感染及HBVDNA復(fù)制情況，不能通過(guò)血清HBVDNA定量推測(cè)肝組織的HBVcccDNA定量水平。 7.在應(yīng)用拉米夫定治療48周后，拉米夫定對(duì)HBeAg轉(zhuǎn)陰組的血清ALT治療效果較好；對(duì)HBeAg持續(xù)陽(yáng)性的血清ALT治療效果不理想；拉米夫定對(duì)血清TBIL有一定程度作用；拉米夫定對(duì)血清PT基本無(wú)影響。本組45例HBeAg陽(yáng)性病人治療后18例HBeAg轉(zhuǎn)陰，本組45例HBeAg陽(yáng)性病人治療后18例HBeAg轉(zhuǎn)陰，由于病例數(shù)較少，樣本