VEGF受體與內(nèi)皮抑素在血管瘤中的表達(dá)及DDRT-PCR方法的應(yīng)用.pdf

1、　　目的：
　　通過半定量RT-PCR方法,檢測(cè)VEGF的兩種受體在血管瘤組織中的表達(dá)情況以及它們同內(nèi)皮抑素之間可能存在的關(guān)系。同時(shí),建立血管瘤組織同自身正常皮膚組織比較的差異顯示PCR研究方法。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)組為15例血管瘤患者的手術(shù)切除標(biāo)本,對(duì)照組為10例大隱靜脈的手術(shù)切除樣本。檢測(cè)指標(biāo)為KDR、Flt-1和endostatin,內(nèi)參照為β-actin。應(yīng)用UNIQ-10總RNA抽提試劑盒提取樣本總RNA,

2、然后進(jìn)行半定量反轉(zhuǎn)錄PCR。將所得產(chǎn)物電泳條帶的亮度通過圖象分析系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為同β-actin條帶亮度的比值,然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。DDRT-PCR方法被用來(lái)檢測(cè)血管瘤同自身正常皮膚組織的基因表達(dá)有無(wú)差異,可疑的差異條帶被分離、回收、再擴(kuò)增后測(cè)序。
　　結(jié)果：
　　血管瘤組的Flt-1、KDR表達(dá)水平(0.6776±0.0286,0.6303±0.0249)較大隱靜脈組(0.4668±0.0312,0.4284±0.026)為高,P

3、值均小于0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；同組中Flt-1同KDR之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；內(nèi)皮抑素在兩組中都只是在部分樣本中才檢測(cè)到,難以比較。利用DDRT-PCR方法得到幾個(gè)可能的差異片段,并選取其中的一個(gè)進(jìn)行了測(cè)序。
　　結(jié)論：
　　KDR、Flt-1在血管瘤組織中的表達(dá)上調(diào)提示,在血管瘤中VEGF及其受體的作用是增強(qiáng)的,VEGF可能在血管瘤的病理過程中起到重要的作用；內(nèi)皮抑素在兩組中都難以檢出,提示內(nèi)皮抑素表