黃芪總黃酮體外抗炎免疫雙向調(diào)節(jié)作用及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：本試驗(yàn)采用傳統(tǒng)中藥黃芪的主要成分黃芪總黃酮為研究對(duì)象，探討了黃芪總黃酮的體外抗炎免疫作用及其相關(guān)作用機(jī)制。
　　方法：以正常條件下和脂多糖（LPS）誘導(dǎo)下的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7為模型，分別設(shè)立空白組和藥物低、中、高劑量組。通過(guò)細(xì)胞毒性測(cè)定，擬定黃芪總黃酮的試驗(yàn)劑量；通過(guò) Griess試劑盒測(cè)定 NO表達(dá)變化，通過(guò) ELISA試劑盒檢測(cè)因子IL-6、IL-1β、IFN-γ、TNF-α和介質(zhì)PGE2等的變化規(guī)律；使用

2、RT-PCR和凝膠電泳方法測(cè)定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞COX-2 mRNA和 iNOS mRNA的含量變化；采用Western blot法分析 iNOS和COX-2蛋白含量變化，同時(shí)檢測(cè)MAPKs信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白p38、ERK1/2和JNK磷酸化水平變化。
　　結(jié)果：1.黃芪總黃酮低、中劑量組在一定程度上上調(diào)了正常條件下 RAW264.7小鼠腹腔巨噬細(xì)胞上清液中NO、PGE2和IL-6、IL-1β、IFN-γ、TNF

3、-α的表達(dá)水平；黃芪總黃酮?jiǎng)┝拷M具有下調(diào)LPS誘導(dǎo)后的RAW264.7小鼠腹腔巨噬細(xì)胞上清液中NO、PGE2和IL-6、IL-1β、IFN-γ、TNF-α的過(guò)度表達(dá)作用。
　　2.黃芪總黃酮各劑量組分別不同程度的上調(diào)了正常條件下細(xì)胞 iNOS和COX-2 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，并抑制了LPS誘導(dǎo)后的iNOS和COX-2 mRNA轉(zhuǎn)錄水平，且滿足一定程度上的劑量依賴關(guān)系。
　　3.低劑量組黃芪總黃酮在一定程度上上調(diào)了小鼠腹腔巨噬

4、細(xì)胞 RAW264.7 iNOS和COX-2蛋白表達(dá)以及通路蛋白 p38和JNK激酶的磷酸化水平，各劑量黃芪總黃酮能顯著的抑制 LPS誘導(dǎo)后iNOS和COX-2的蛋白以及通路蛋白p38和JNK激酶的磷酸化，并呈劑量依賴關(guān)系，對(duì)ERK的磷酸化水平無(wú)明顯作用。
　　結(jié)論：研究表明，黃芪總黃酮通過(guò)調(diào)控正常條件下和 LPS誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7細(xì)胞 ERK1/2和 p38 MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路以及 iNOS和 COX-2 mRNA和蛋