裙帶菜多糖免疫調節(jié)作用的體外實驗研究.pdf

1、目的：分離純化出裙帶菜多糖活性成分，觀察裙帶菜多糖對人外周血單個核細胞(PBMC)增殖、淋巴細胞亞群、細胞因子分泌的影響，探討裙帶菜多糖的免疫調節(jié)機理。 方法： 1.采用逐步分離法對裙帶菜多糖進行分離與純化。采用水提醇沉法進行初步分離，柱層析法進一步純化，應用硫酸--苯酚法進行成分鑒定。 2.采用MTT法分析裙帶菜多糖提取物對人外周血淋巴細胞體外增殖作用的影響。 3.用流式細胞術檢測淋巴細胞亞群的變化。

2、 4.應用酶聯(lián)免疫方法測定裙帶菜多糖作用后淋巴細胞培養(yǎng)上清中細胞因子的濃度。 結果： 1.裙帶菜粗提液經Sephadex G-100凝膠過濾層析柱進一步純化后，經硫酸一苯酚法鑒定，得到單一的對稱峰，最終得到多糖化合物。 2.裙帶菜多糖對PBMC增殖的影響與陰性對照組相比，裙帶菜多糖對PBMC的增殖反應有明顯的促進作用，隨著濃度的增加，增殖反應明顯增強，其中，20μg/ml濃度組OD值最高(0.216±0.0

3、07)，隨著多糖濃度的繼續(xù)增加,OD值逐漸下降，但仍明顯高于陰性對照組。 3.裙帶菜多糖對淋巴細胞亞群的影響與陰性對照組相比，不同濃度的裙帶菜多糖可刺激CD4+T細胞的增殖，但經統(tǒng)計學檢驗無顯著性差異；隨著裙帶菜多糖濃度的增加，CD8T細胞的比例有明顯增加，較陰性對照組相比有顯著性差異；但各濃度組裙帶菜多糖對B細胞增殖反應無明顯影響，與陰性對照組相比無顯著差異；除0.5μg/ml組外，隨著裙帶菜多糖濃度的增加，NK細胞比例漸增高

4、，與陰性對照組相比，差異有顯著性，在20μg/m1時，達到最高，為9.67±1.53。 4.裙帶菜多糖對PBMC分泌細胞因子的影響不同濃度的裙帶菜多糖對PBMC產生IL-6的作用無明顯影響；但裙帶菜多糖可明顯刺激PBMC產生IL-2，20μg/ml時達最高，為陰性對照組的2.19倍；各濃度組裙帶菜多糖對PBMNC產生IL-10作用無明顯影響。 結論： 1.裙帶菜多糖可明顯刺激人外周血淋巴細胞的增殖。 2.