黑斑息肉綜合征雙氣囊小腸鏡治療的臨床研究及其STK11-LKB1基因突變篩查.pdf

1、目的：
　　黑斑息肉綜合征（Peutz-Jeghers syndrome,PJS）是一種少見的遺傳性疾病，以皮膚黏膜色素沉著和胃腸道息肉為特征性表現(xiàn)。PJS患者息肉腫瘤性改變（上皮內(nèi)瘤變、癌變等）發(fā)生率可達3％-6%，同時伴發(fā)胃腸道內(nèi)外腫瘤的發(fā)生率是正常人群的4倍，包括大腸、乳腺、小腸、胃及胰腺腫瘤，PJS患者一生中癌的發(fā)生率可達37%-93%。PJS患者消化道多發(fā)息肉常會引起腸套疊、腸梗阻及消化道出血。其癌變傾向和并發(fā)癥導(dǎo)致患者

2、反復(fù)住院，危害極大。
　　雙氣囊小腸鏡（Double-balloon enteroscopy,DBE)作為一種新的內(nèi)鏡技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于不明原因小腸出血、克羅恩病、炎癥性腸病、小腸息肉以及小腸腫瘤等疾病的臨床診斷中，近年來，多項研究報道DBE在小腸疾病的治療中起到極其重要的作用，尤其是內(nèi)鏡下小腸息肉摘除。
　　PJS的主要致病基因是STK11/LKB1，研究報道大約有30%~67%的PJS患者存在STK11/LKB1基因的胚

3、系突變，小部分存在體細胞突變。STK11/LKB1基因突變導(dǎo)致的STK11/LKB1蛋白激酶失活可引起包括PJS的多種疾病的發(fā)生。目前，在PJS和散發(fā)腫瘤中已經(jīng)檢測出200多種STK11/LKB1基因突變。然而STK11/LKB1確切的致病機制錯綜復(fù)雜，至今未能完全闡明，不同的STK11/LKB1基因突變可能通過作用于細胞活動的不同環(huán)節(jié)導(dǎo)致疾病發(fā)生。因此，研究PJS在DBE下息肉切除的安全性和有效性以及進一步豐富STK11/LKB1基因

4、新的突變位點具有特別重要的理論和實際意義。
　　本研究包括兩個部分內(nèi)容，分別探討DBE對PJS治療的安全性和有效性以及Peutz-Jeghers綜合征中STK11/LKB1基因突變研究。
　　方法：
　　第一部分：回顧性分析2010年1月至2014年1月長海醫(yī)院接受雙氣囊小腸鏡檢查和治療的38例PJS患者的臨床資料，通過查閱病例和電話隨訪獲得以下內(nèi)容：臨床特征（年齡、性別、外科手術(shù)史）、治療結(jié)果（每次住院切除小腸息肉的

5、數(shù)量、每次住院切除大于2cm小腸息肉的數(shù)量、每次住院切除小腸息肉的最大尺寸、全小腸檢查數(shù)）、并發(fā)癥以及內(nèi)鏡治療后外科手術(shù)發(fā)生數(shù)。量化值概括為平均值（標準差），不同住院次數(shù)之間變量間的差異性采用Friedman檢驗。P值小于0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　第二部分：同時采用直接測序法和MLPA技術(shù)對1個遺傳性家系及16個散發(fā)性家系中的18例PJS患者、17例正常人對STK11/LKB1基因進行檢測分析。
　　結(jié)果：
　　第一

6、部分結(jié)果：共納入38例患者（男性14例，平均年齡30.5±11.1歲），平均住院次數(shù)為1.4±0.6次，共行雙氣囊小腸鏡102次。隨著住院次數(shù)的增加，每次住院切除大于20mm的小腸息肉平均數(shù)量明顯降低（第一次3.4；第二次0.4；第三次0.1；P<0.001）。同樣，切除小腸息肉的最大尺寸也明顯降低（第一次36.5mm；第二次5.47mm；第三次1.32mm；P<0.001）。1例患者發(fā)生術(shù)后延遲出血，經(jīng)內(nèi)鏡下止血夾止血后緩解，3例患者

7、發(fā)生小腸穿孔，其中1例保守治療成功，2例轉(zhuǎn)至外科手術(shù)治療。只有2例患者研究期間因為腸套疊行外科手術(shù)治療。1例患者因小腸息肉癌變死亡。
　　第二部分結(jié)果：
　　Sanger測序法對STK11/LK B1基因進行突變檢測：整個STK11/LKB1基因的編碼區(qū)通過聚合酶鏈反應(yīng)進行擴增，然后通過直接測序法對17個PJS家系進行分析，直接測序法分析的結(jié)果顯示，17例先證者中有8例（47.1%，8/17）發(fā)現(xiàn)了基因突變，包括6種不同的突

8、變類型：兩種錯義突變和四種截短突變。這8例突變都與疾病的表型呈共分離現(xiàn)象。通過對正常對照進行直接測序法分析，沒有檢測到同樣基因突變。以上含兩種與PJS患者合并惡性腫瘤有關(guān)的基因突變，相關(guān)惡性腫瘤分別為結(jié)腸癌和肺癌。所測6種基因突變均符合國際報道，包括2個錯義突變（c.521 A>G,c.526 G>A）和4個缺失突變（c.179_180insA,IVS1+1 G>A,IVS5+2 T>C,IVS5+1G>A）。多重連接探針擴增技術(shù)對ST

9、K11/LKB1基因進行大片段缺失/重復(fù)檢測：對直接測序法未檢測到基因突變的9例PJS先證者進行MLPA檢測分析，我們在3例先證者中發(fā)現(xiàn)STK11/LK B1基因的大片段缺失，基因大片段缺失的發(fā)生率為33.3%，通過MLPA方法我們發(fā)現(xiàn)了兩例1號外顯子缺失（c.-1114-_290+del）以及一例3號外顯子缺失（c.375-_464+del）。同時對健康對照和其他家系人員進行MLPA檢測，表明STK11/LKB1基因的大片段缺失與疾病