EGFR、CTEN和E-cad在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景和目的
　　根據(jù)我國第三次死因回顧調(diào)查報(bào)告顯示，肺癌已成為我國居民腫瘤死因的第1位，占惡性腫瘤的22.7％。肺癌死亡率在過去的30年里增加了464.84％，成為中國增長最快，危害最嚴(yán)重的惡性腫瘤。肺癌中非小細(xì)胞肺癌(no-smallcelllungcancer，NSCLC)占80％，由于被發(fā)現(xiàn)時(shí)大多數(shù)肺癌患者已發(fā)生轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致75％患者已失去手術(shù)機(jī)會(huì)。惡性腫瘤細(xì)胞浸潤能力的增強(qiáng)在惡性腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移的中扮演一個(gè)重要的角色。在這

2、些步驟中，基因、信號傳導(dǎo)通路及因子相互作用等共同參與。惡性腫瘤生存預(yù)后與轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)密切相關(guān)，尋找與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的特異性蛋白，可能為臨床治療提供新的靶點(diǎn)。
　　表皮生長因子受體（epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR）是具有酪氨酸激酶活性的跨膜受體糖蛋白，屬于表皮生長因子家族，又被稱為ErbB-1、HER1，它由胞外域、跨膜區(qū)及胞內(nèi)域三部分組成;EGFR與其配體結(jié)合相形成二聚體，自身發(fā)生磷

3、酸化，從而激活下游信號傳導(dǎo)通路。與EGFR相關(guān)的兩條主要信號傳導(dǎo)通路:Ras-MAPK信號傳導(dǎo)通路，該信號傳導(dǎo)通路與細(xì)胞增殖激活有關(guān);另一條是PI3K-Akt信號傳導(dǎo)通路，該通路與細(xì)胞遷移增強(qiáng)有關(guān)，并且這條傳導(dǎo)通路的激活是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelialMesenchymaltransition，EMT)的核心特征，與腫瘤血管形成，侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EGFR在惡性腫瘤細(xì)胞中異常表達(dá)，包括直腸癌、胰腺癌、頭頸部癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌等

4、。
　　CTEN是tensin蛋白家族中的一員，目前為止tensin蛋白家族成員中共有4個(gè)。4個(gè)成員在C端均具有PTB結(jié)構(gòu)區(qū)域(phosphotyrosine-bindingdomain)和SH2結(jié)構(gòu)區(qū)域(SreHomolo2domain)。研究結(jié)果示，SH2結(jié)構(gòu)域可與PI3K、FAK(FocalAdhesionKinas)和pl30Cas(p13oCrk-associatedsubstrate)相結(jié)合，這與許多惡性腫瘤相關(guān)。CT

5、EN在2002年被克隆出，CTEN基因位于人17號染色體q21區(qū)域;cDNA全長4015bP。人們開始發(fā)現(xiàn)CTEN蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)率下降。然而，越來越多的實(shí)驗(yàn)研究表明CTEN蛋白在其它惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，如乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌等，因此，CTEN被認(rèn)為在調(diào)控惡性腫瘤細(xì)胞形態(tài)、遷移、信號傳導(dǎo)等過程中起重要作用。
　　E-鈣黏附蛋白(epitheliacadherin，E-cadherin，E-cad)是細(xì)胞粘附分子鈣

6、依賴性粘附素家族中一員。E-cad蛋白表達(dá)于上皮細(xì)胞，通過參與信號傳導(dǎo)和細(xì)胞粘附，以調(diào)控細(xì)胞分化，同時(shí)參與維持上皮組織結(jié)構(gòu)完整性及上皮細(xì)胞之間粘附力。研究報(bào)道，E-cad蛋白在上皮細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)能夠抑制細(xì)胞增殖和游走，也能引起細(xì)胞凋亡。另外，在惡性腫瘤組織中E-cad蛋白功能發(fā)生障礙，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞之間粘附力減弱，細(xì)胞脫離原發(fā)灶而發(fā)生局部或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。研究表明，E-cad蛋白在惡性腫瘤中表達(dá)下降，其下降機(jī)制可能是:E-cad基因突變或缺失、啟

7、動(dòng)子的甲基化、抑制轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等。
　　目前關(guān)于EGFR、CTEN和E-cad在NSCLC組織中表達(dá)及關(guān)系的研究國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道較少，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化SP法檢測NSCLC組織中EGFR、CTEN和E-cad蛋白的表達(dá);并分析其表達(dá)情況與病理的類型、分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的關(guān)系;和三者之間的相關(guān)性，為NSCLC早期診斷和臨床治療提供新的思路。
　　材料與方法
　　1.研究對象
　　選取我

8、校第二附屬醫(yī)院胸外科2012年3月至2013年3月手術(shù)切除NSCLC組織82例和正常肺組織標(biāo)本54例（病理HE染色均證實(shí)）。所有患者術(shù)前均未經(jīng)放化療及生物治療，均有完整的臨床病理資料。
　　2.研究方法
　　將選取好的石蠟塊在切片機(jī)上制成4μm厚切片，按免疫組化SP法進(jìn)行檢測，操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行;一病抗均按1∶100倍稀釋。一抗作空白對照用PBS代替，EGFR，CTEN和E-cad陽性切片作為陽性對照。
　

9、　3.免疫組化結(jié)果判定方法
　　用雙盲法判定結(jié)果，由兩位病理科資深醫(yī)生單獨(dú)觀測每張切片后作出判定，判定水準(zhǔn)應(yīng)用半定量評分法。根據(jù)細(xì)胞陽性百分比及染色強(qiáng)度準(zhǔn)則:染色強(qiáng)度評分:0分無色，1分淡黃色，2分棕黃色，3分為褐色;細(xì)胞陽性百分比計(jì)分:0為陰性，～10％為1分，～50％為2分，～75％為3分，＞75％為4分。根據(jù)染色強(qiáng)度評分與細(xì)胞陽性百分比乘積得分≥4分，則為陽性表達(dá)。E-cad蛋白的陽性表達(dá)情況主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃

10、色顆粒樣物質(zhì)。E-cad蛋白判斷標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞陽性數(shù)≥70.0％為正常表達(dá)，計(jì)為陽性，＜70.0％為異常表達(dá)即表達(dá)為陰性。
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)使用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析:x2檢驗(yàn)正常肺組織和癌組織中三種蛋白表達(dá)的差異，同時(shí)分析癌組織中三種蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系;Spearman相關(guān)分析癌組織中三種蛋白關(guān)聯(lián)性;以a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果
　　1.EGFR、CTEN和E-ca

11、d蛋白在正常肺組織、NSCLC組織中的表達(dá)
　　EGFR蛋白主要定位于細(xì)胞膜和胞質(zhì)，呈棕褐色顆粒;CTEN蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞胞質(zhì)，呈淡黃色至棕褐色顆粒;E-cad蛋白主要定位于細(xì)胞膜和胞質(zhì)，呈棕褐色顆粒。EGFR蛋白在正常肺組織和NSCLC組織表達(dá)率分別為13.0％和58.5％，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=33.242P＜0.001);CTEN蛋白在正常肺組織和NSCLC組織表達(dá)率分別為0.0％和69.5％，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

12、x2=64.620P＜0.001);E-cad蛋白在NSCLC組織和正常肺組織表達(dá)率分別為28.1％和100.0％，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=68.625P＜0.001）。
　　2.EGFR、CTEN和E-cad蛋白在NSCLC組織中的陽性表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系
　　EGFR、CTEN和E-cad蛋白陽性表達(dá)與患者年齡、性別、病理類型均無關(guān)(P＞0.05)，與分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)(P＜0.05)。<

13、br>　　3.NSCLC組織中EGFR、CTEN和E-cad蛋白表達(dá)之間的關(guān)系
　　EGFR和CTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析呈正相關(guān)（r=0.626P=0.000）;EGFR和E-cad蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析呈負(fù)相關(guān)（r=-0.577P=0.000）;E-cad蛋白和CTEN蛋白陽性表達(dá)的相關(guān)性分析呈負(fù)相關(guān)(r=-0.353P=0.001);
　　結(jié)論
　　1.EGFR、CTEN和E-cad蛋白異常表達(dá)，在NSCLC發(fā)生發(fā)