雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架對小型豬冠狀動脈內(nèi)膜增生及CDC2、MMP-2蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景及目的： 目前臨床廣泛應(yīng)用的藥物洗脫支架（drug-eluting stent，DES）主要是雷帕霉素洗脫支架（sirolimus-eluting stent，SES）和紫杉醇藥物洗脫支架（paclitaxel-eluting stent，PES），經(jīng)多中心、大規(guī)模、隨機(jī)和雙盲實(shí)驗(yàn)證實(shí)這兩種藥物支架均能有效減少支架內(nèi)再狹窄，減少晚期管腔丟失和靶病變血運(yùn)重建。但是，藥物支架在抑制血管平滑肌細(xì)胞增生防治再狹窄的同時，延遲血管

2、內(nèi)皮修復(fù)過程，增加亞急性血栓和晚期血栓形成，從而影響遠(yuǎn)期療效。因此探索一種既能有效降低再狹窄又能減少血栓形成的新型藥物支架是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。發(fā)揮我國中醫(yī)藥的優(yōu)勢，研制具有自主知識產(chǎn)權(quán)的國產(chǎn)藥物洗脫支架，使更多的病人獲益，有著重大的意義。本課題是在我課題組原來研究基礎(chǔ)上的延伸和深入，探討雷公藤內(nèi)酯醇藥物洗脫支架對小型豬冠狀動脈內(nèi)膜增生及CDC2、MMP-2蛋白表達(dá)的影響，為雷公藤內(nèi)酯醇藥物洗脫支架的進(jìn)一步研制和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3、 實(shí)驗(yàn)方法： 1．30只健康國內(nèi)西藏小型豬隨機(jī)分為5組，不銹鋼裸支架組、雷帕霉素洗脫支架組、雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架60μg組、100μg組和200μg組，每組支架12枚。每只豬選擇左前降支和右冠狀動脈分別置入同一類型支架各1枚（型號均為2．5mm×23mm），共置入支架60枚。設(shè)立7d和28d兩個觀察終點(diǎn)，7d觀察終點(diǎn)每組各2只豬，28d觀察終點(diǎn)每組各4只豬。術(shù)后7d和28d復(fù)查冠狀動脈造影后放血處死動物，分離冠狀動脈支架血管段

4、固定。 2．測定冠狀動脈外彈力膜層橫斷面積、支架上平均內(nèi)膜厚度、支架間平均內(nèi)膜厚度，觀察血管平滑肌細(xì)胞的移行、增殖及內(nèi)膜厚度變化，計算血管損傷積分。 3．免疫組織化學(xué)操作：用免疫組織化學(xué)方法檢測冠狀動脈組織中MMP-2和CDC2的蛋白表達(dá)水平，并進(jìn)行半定量分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1．各組支架置入導(dǎo)致的冠狀動脈血管損傷積分五組總體比較無統(tǒng)計學(xué)差異（p=0．457）。支架植入后7d，裸支架組和雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架

5、60μg組可見增生內(nèi)膜幾乎全部包繞支架撐桿，雷帕霉素洗脫支架組、雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架100μg組和200μg組支架撐桿兩側(cè)可見內(nèi)膜增生，管腔面支架裸露。支架植入后28d各組血管內(nèi)膜完全內(nèi)皮化，裸支架組和雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架60μg組支架上內(nèi)膜厚度、支架間內(nèi)膜膜厚度均較雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架100μg和200μg組、雷帕霉素洗脫支架組厚，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0．01）。 2．免疫組織化學(xué)分析示MMP-2蛋白陽性位于動脈中膜SMC

6、的胞漿，支架植入后7d和28d，MMP-2蛋白在裸支架組、雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架60μg組中強(qiáng)表達(dá)，雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架100μg組、200μg組和雷帕霉素洗脫支架組弱表達(dá)，平均光密度值經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較，有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（p<0．01）。 3．免疫組織化學(xué)分析示CDC2蛋白主要在冠狀動脈壁SMC胞核中表達(dá)，胞漿中也有少量表達(dá)。7d和28d時，裸支架組和雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架60μg組CDC2蛋白強(qiáng)表達(dá)；雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架100μg組和

7、雷帕霉素洗脫支架組弱表達(dá)（p<0．01）；在雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架200μg組7d強(qiáng)表達(dá)而28d弱表達(dá)。 結(jié)論： 1．雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架100μg和200μg能通過抑制MMP-2的表達(dá)抑制平滑肌細(xì)胞遷移和增殖。 2．雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架100μg能阻抑細(xì)胞周期于G2/M期抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞凋亡。 3．雷公藤內(nèi)酯醇洗脫支架200μg早期對局部組織有毒性作用，后期對平滑肌細(xì)胞增殖有抑制作