腎靶向雷公藤內(nèi)酯醇—溶菌酶結(jié)合物研究.pdf

1、腎臟疾病，尤其是免疫相關(guān)的腎臟疾病的，正成為威脅人類健康的常見疾病之一。常見的腎臟疾病包括原發(fā)性和繼發(fā)性腎小球、腎小管、腎介質(zhì)及腎血管等疾病，其中最常見的有急性腎炎、慢性腎炎、原發(fā)性腎病綜合癥及尿路感染等上述疾病不斷發(fā)展，在后期可出現(xiàn)發(fā)展成為末期腎病(ESRD)。病人不得不依靠昂貴的血液透析或腎移植來延長生命，給患者家庭和社會(huì)帶來沉重負(fù)擔(dān)。目前國內(nèi)臨床上治療腎臟疾病常采用激素沖擊治療，雷公藤多甙片維持治療的治療方案。大劑量使用激素和長期

2、服用雷公藤多甙片所帶來的毒副作用嚴(yán)重限制了腎臟疾病的治療。因此，腎臟疾病臨床治療中，研究發(fā)展腎臟的靶向給藥系統(tǒng)，以提高腎臟藥物濃度和降低毒副作用，具有十分重要的意義。 1977年我國科學(xué)家在國際上首創(chuàng)應(yīng)用中藥雷公藤治療慢性腎炎獲得成功。其制劑采用雷公藤根(去皮)經(jīng)粉碎、提取、精制得雷公藤多甙，壓制成片劑，其成分復(fù)雜、質(zhì)量不穩(wěn)定和不良反應(yīng)較多。本課題采用其主要有效成分雷公藤內(nèi)酯醇為模型藥物，選用溶菌酶為載體，研究雷公藤內(nèi)酯醇的溶菌

3、酶前體藥物的合成、表征、體內(nèi)外特性。為研究可以產(chǎn)生局部的免疫抑制和抗炎作用、毒副作用低的腎靶向新藥提供科學(xué)基礎(chǔ)。 本研究制備了雷公藤內(nèi)酯醇一溶菌酶結(jié)合物(TPS-LZM)。首先合成了雷公藤內(nèi)酯醇丁二酸酯，應(yīng)用熔點(diǎn)、UV、HPLC、IR、MS、<'1>H-NMR等進(jìn)行了鑒定，確證了雷公藤內(nèi)酯醇丁二酸酯的結(jié)構(gòu)。然后雷公藤內(nèi)酯醇丁二酸酯與溶菌酶反應(yīng)制備了目標(biāo)結(jié)合物(TPS-LZM)。TPS-LZM中TP/LZM摩爾比約為1:1，質(zhì)量比

4、約為0.25％。以3％甘露醇為凍干保護(hù)劑，將TPS-LZM結(jié)合物制成了溶液型凍干粉針劑，劑量每瓶1 mg，并進(jìn)行了制劑綜合性能評價(jià)；本制劑有一定吸濕性，其相對臨界濕度為72％，應(yīng)密閉貯存。體外理化性質(zhì)研究表明：TPS-LZM結(jié)合物在不同pH值緩沖液以及小鼠血漿中的穩(wěn)定性研究結(jié)果顯示其在體外環(huán)境中比較穩(wěn)定。在pH=2～8溶液中，37℃下放置12 h水解產(chǎn)生游離TP的量小于2％；在30％大鼠血漿中，37℃條件下放置2 h，水解產(chǎn)生游離TP的

5、量小于10％。在大鼠腎溶酶體溶液中能夠12 h釋放80％以上游離原藥，表明結(jié)合物能夠在到達(dá)腎臟之前穩(wěn)定存在一段時(shí)間，避免在到達(dá)靶組織之前被降解；到達(dá)目的細(xì)胞器后又能夠釋放出活性母藥。 體外吸收模型實(shí)驗(yàn)表明：結(jié)合物能夠與近端小管細(xì)胞迅速結(jié)合，雷公藤內(nèi)酯醇對溶菌酶的結(jié)合沒有改變其能夠被近端小管細(xì)胞攝取的特性。單層近端小管細(xì)胞吸收和釋放實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)結(jié)合物能被吸收，其活性藥物的釋放主要向細(xì)胞的基底膜側(cè)。采用MTT比色法考察了結(jié)合物與原藥的對

6、近端小管上皮細(xì)胞的毒性。研究顯示，結(jié)合物和原藥濃度越高，對腎近段小管上皮細(xì)胞作用時(shí)間越長，則細(xì)胞毒性越大，但結(jié)合物的毒性小于原藥，特別是在高藥物濃度下毒性差距更大。 體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)顯示：與原藥相比，結(jié)合物綜合表現(xiàn)為：具有較短的血漿半衰期；具有較好的腎靶向性和滯留時(shí)間；在其它各臟器中的分布減少。藥理學(xué)研究表明：結(jié)合物能夠明顯改善實(shí)驗(yàn)所致大鼠腎炎和缺血再灌注引起的損傷，其對肝臟和睪丸的毒性降低，對機(jī)體整個(gè)免疫系統(tǒng)的影響較小，有一定局部