雷公藤內(nèi)酯醇抗非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞增殖和遷移的機理研究.pdf

1、第一部分 雷公藤內(nèi)酯醇抗淋巴瘤細(xì)胞增殖效應(yīng)的實驗研究 [目的]研究雷公藤內(nèi)酯醇在體外抗淋巴瘤細(xì)胞增殖的效應(yīng)。 [方法]選擇Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞，與濃度為0、6.25nmol/L、12.5nmol/L、25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L的雷公藤內(nèi)酯醇分別培養(yǎng)0h、24h、36h、48h、60h和72h。采用MTT法檢測對Raji細(xì)胞增殖的作用。[結(jié)果]雷公藤內(nèi)酯醇以時間和劑

2、量依賴方式抑制Raji細(xì)胞的增殖，加藥組與未加藥的對照組相比，OD值明顯減少。24h、36h、48h、60h和72h的半數(shù)抑制濃度IC50值分別為43.06nmol/L、25.08nmol/L、7.32nmol/L、2.66nmol/L和0.58nmol/L。 [結(jié)論]雷公藤內(nèi)酯醇具有抗淋巴瘤細(xì)胞體外增殖的效應(yīng)。 第二部分 雷公藤內(nèi)酯醇影響非霍奇金淋巴瘤SDF-1/CXCR4 生物學(xué)軸效應(yīng)的研究

3、[目的]研究雷公藤內(nèi)酯醇對非霍奇金淋巴瘤(NHL)SDF-1/CXCR4生物學(xué)軸的作用。 [方法]采用RT-PCR方法檢測雷公藤內(nèi)酯醇對NHL患者淋巴結(jié)基質(zhì)細(xì)胞SDF-1α表達(dá)的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測雷公藤內(nèi)酯醇對NHL淋巴結(jié)瘤細(xì)胞CXCR4表達(dá)的作用；采用Transwell微孔隔離室遷移實驗觀察雷公藤內(nèi)酯醇對NHL淋巴結(jié)瘤細(xì)胞體外遷移的影響。 [結(jié)果]①雷公藤內(nèi)酯醇能抑制NHL淋巴結(jié)基質(zhì)細(xì)胞SDF-1α的表達(dá)，其中較

4、低劑量組(12.5nmol/L)與對照組相比有一定的降低，但差異無顯著性(1.15±0.33vs1.22±0.30P＞0.05)，而較高劑量組(25、50nmol/L)則可明顯抑制SDF-1α的表達(dá)(0.88±0.35；0.74±0.32，P＜0.01)，并具有量效關(guān)系； ②NHL淋巴結(jié)瘤細(xì)胞經(jīng)不同濃度雷公藤內(nèi)酯醇(12.5、25、50nmol/L)處理后，CXCR4表達(dá)率與對照組(17.37％±7.21％)相比，逐漸降至(11

5、.13％±5.66％，P＜0.05)、(8.30％±4.61％，P＜0.01)和(3.31％±2.35％，P＜0.01)，此抑制效應(yīng)呈劑量依賴性； ③雷公藤內(nèi)酯醇能抑制重組人SDF-1α對NHL淋巴結(jié)瘤細(xì)胞的趨化作用，不同濃度雷公藤內(nèi)酯醇(12.5、25、50nmol/L)處理后細(xì)胞遷移率由對照組(75.4％±15.8％)降至(59.4％±17.3％)、(30.3％±13.8％)和(21.4％±9.9％)；此外雷公藤內(nèi)酯醇還能抑

6、制NHL淋巴結(jié)基質(zhì)細(xì)胞對瘤細(xì)胞的體外遷移，細(xì)胞遷移率由(61.1％±15.5％)降至(53.4％±17.3％)、(20.8％±7.4％)、(15.4％±6.3％)，雷公藤內(nèi)酯醇對趨化作用的抑制也具有劑量依賴性。 [結(jié)論]雷公藤內(nèi)酯醇能抑制NHL淋巴結(jié)基質(zhì)細(xì)胞SDF-1和瘤細(xì)胞表面CXCR4受體的表達(dá)，阻斷NHL淋巴結(jié)瘤細(xì)胞向重組人SDF-1或接種的淋巴結(jié)基質(zhì)細(xì)胞的遷移，因此雷公藤內(nèi)酯醇能阻斷NHL淋巴結(jié)瘤細(xì)胞通過淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，具

7、有抗NHL腫瘤侵襲的作用，其機制與雷公藤內(nèi)酯醇對NHLSDF-1/CXCR4生物學(xué)軸的抑制效應(yīng)有關(guān)。 第三部分 雷公藤內(nèi)酯醇對Raji細(xì)胞黏著斑激酶表達(dá)的影響 [目的]研究雷公藤內(nèi)酯醇對Raji細(xì)胞黏著斑激酶表達(dá)的影響。 [方法]選擇Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞，用濃度為25nmol/L的雷公藤內(nèi)酯醇分別培養(yǎng)4h和24h。采用WesternBlot、免疫沉淀的測定方法研究雷公藤內(nèi)酯醇對Bur

8、kitt淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞粘著斑激酶蛋白表達(dá)和活力的影響。 [結(jié)果]①雷公藤內(nèi)酯醇分別作用于Raji細(xì)胞4h和24h，加入雷公藤內(nèi)酯醇4h后，F(xiàn)AK的蛋白質(zhì)含量變化不明顯；而作用24h后黏著斑激酶蛋白的含量較對照組明顯降低(P＜0.05)；②雷公藤內(nèi)酯醇作用Raji細(xì)胞4h和24h，4h及24h作用后黏著斑激酶的活力較對照組均明顯降低(4hP＜0.05，24hP＜0.01)。 [結(jié)論]雷公藤內(nèi)酯醇可降低Burkit