酒精性肝纖維化中醫(yī)證候?qū)W和調(diào)肝理脾方作用機(jī)理研究.pdf

1、酒精性肝纖維化(ALF)是以肝星狀細(xì)胞(HSC)為主的細(xì)胞激活增殖，肝臟的幾種效應(yīng)細(xì)胞通過自/旁分泌致病/抗病因子和炎性介質(zhì)相互作用，使細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)各成分合成明顯增多，降解相對(duì)減少的動(dòng)態(tài)可逆病理過程。酒精性肝纖維化是輕癥酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化向酒精性肝硬化發(fā)展的必經(jīng)之路，具有可逆性，研究肝纖維化的形成機(jī)制是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一。中醫(yī)藥在防治酒精性肝病方面具有潛在的優(yōu)勢和鮮明的特點(diǎn)。 本課題由理

2、論研究、臨床及實(shí)驗(yàn)研究三部分組成：理論研究部分，一部分對(duì)中醫(yī)藥防治酒精性肝病/肝纖維化進(jìn)展進(jìn)行了綜述，對(duì)導(dǎo)師田德祿教授防治酒精性肝病/肝纖維化的學(xué)術(shù)思想進(jìn)行了繼承和闡述；另一部分系統(tǒng)論述了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)酒精性肝纖維化防治的研究成果。 臨床部分，為多中心前瞻性研究。以符合臨床流行病學(xué)要求的全國五家醫(yī)院病例資料為基礎(chǔ)，對(duì)酒精性肝纖維化患者的臨床資料進(jìn)行調(diào)查，探討酒精性肝纖維化患者中醫(yī)證候分布的特點(diǎn)；應(yīng)用主成分分析的方法，研究了199例酒

3、精性肝纖維化患者中醫(yī)證候特點(diǎn)的分布，以及國內(nèi)酒精性肝纖維化發(fā)病的特點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)部分以酒精性肝纖維化大鼠模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，對(duì)模型大鼠一般生理指標(biāo)和病理指標(biāo)進(jìn)行了動(dòng)態(tài)觀察，探討了酒精性肝纖維化啟動(dòng)期和發(fā)展期的病理機(jī)制；應(yīng)用中藥復(fù)方調(diào)肝理脾方對(duì)模型大鼠進(jìn)行干預(yù)治療，并對(duì)其抗纖維化的藥效學(xué)機(jī)制進(jìn)行研究，為臨床應(yīng)用防治酒精性肝纖維化提供理論基礎(chǔ)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)資料。 實(shí)驗(yàn)研究，主要進(jìn)行了整體實(shí)驗(yàn)。方法：1清潔劑Wistar雄性大鼠共1

4、20只，采用“白酒4.8g/(kg·d)、吡唑24mg/(kg·d)、玉米油2ml/(kg·d)”混合物，灌胃配合飼喂高脂飼料(基礎(chǔ)飼料：膽固醇：豬大油=79％：1％：20％)的方法制備大鼠酒精性肝纖維化動(dòng)物模型。分別于造模4w、8w、12w、16w隨機(jī)采血，分別檢測血清ALB、GGTP、AST、ALT、HA、PⅢP、CⅣ、LN含量；取大鼠肝組織常規(guī)石蠟包埋、切片行HE染色、Mallory染色； 2以正常大鼠做陰性對(duì)照，采用生化

5、分析方法檢測酒精性肝纖維化早期(造模16w)；采用超薄切片、光鏡觀察大鼠肝組織病理變化特點(diǎn)；采用免疫組化法檢測肝組織TGF-β1蛋白的表達(dá)； 3造模結(jié)束(16w)后，大鼠隨機(jī)分成7組：A.正常對(duì)照組(正常大鼠生理鹽水灌胃)，B.模型對(duì)照組(生理鹽水代替藥物灌胃)，C.復(fù)方調(diào)肝理脾方小劑量治療組，D.復(fù)方調(diào)肝理脾方中劑量治療組，E.復(fù)方調(diào)肝理脾方大劑量治療組，F(xiàn).中藥對(duì)照組(復(fù)方鱉甲軟肝片)，J.西藥對(duì)照組(安琺特)，治療4w后取

6、材。采用生化分析的方法檢測血清ALB、AST、ALT、GGTP、PⅢP、CⅣ、LN、HA含量；肝組織常規(guī)石蠟切片HE染色、Mallory染色；肝組織石蠟切片TGF-β1免疫組化染色； 4采用SPSS13.0軟件對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，求平均數(shù)，作單因素方差分析。 結(jié)果：通過以上實(shí)驗(yàn)得到下列結(jié)果：1酒精性肝纖維化啟動(dòng)或進(jìn)展期，血清中AST/ALT比值及HA含量顯著升高； 2酒精性肝纖維化發(fā)生過程中伴隨肝細(xì)胞脂

7、肪、糖和蛋白質(zhì)代謝紊亂； 3實(shí)驗(yàn)性酒精性肝纖維化主要病理特征是匯管區(qū)和竇周纖維化； 4復(fù)方調(diào)肝理脾方抗酒精性肝纖維化的作用機(jī)制主要為：4.1促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生大量抗氧化因子，提高機(jī)體對(duì)自由基的清除能力；4.2保護(hù)肝細(xì)胞，修復(fù)肝細(xì)胞損傷，降低轉(zhuǎn)氨酶；4.3顯著降低動(dòng)物血清中CIV型膠原及HA水平，能有效阻止肝纖維化的進(jìn)程；4.4通過下調(diào)TGF-β1蛋白表達(dá)而阻斷肝纖維化的進(jìn)行。 結(jié)論：通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析及各指標(biāo)間關(guān)系的深入探

8、討，研究結(jié)論如下：研究結(jié)果及結(jié)論：(1)臨床研究：實(shí)驗(yàn)一：男性為主要的飲酒和ALF發(fā)病人群；ALF的發(fā)病高峰年齡在45歲左右。不同職業(yè)人群ALF發(fā)生率有所不同，商人、干部最高，分別為38.69％和27.64％；日飲酒量140g/d，飲酒年限20年，累計(jì)酒精攝入量1000kg左右時(shí)，ALF的發(fā)生率最高。ALF患者中γ-GT值增高者所占的比例較大，AST/ALT比值≤2(85.42％)、堿性磷酸酶(ALP)值增高(＞110U/L)的出現(xiàn)率較

9、高(60.8％)。ALF時(shí)患者肝纖維化血清標(biāo)志物顯著升高。 實(shí)驗(yàn)二：患者中醫(yī)證候特點(diǎn)為邪實(shí)為主，虛實(shí)夾雜；中醫(yī)病位主要在肝脾，涉及膽胃；ALF中醫(yī)病機(jī)主要為氣滯、血瘀、濕熱內(nèi)蘊(yùn)，兼有正虛。累計(jì)攝酒量以及家族酗酒史條件下的累計(jì)攝酒量是影響ALF患者中醫(yī)證候特點(diǎn)分布的重要因素，具有極顯著性差異；總膽紅素值對(duì)ALF患者中醫(yī)證候特點(diǎn)的分布有極顯著性的影響，肝纖維化血清標(biāo)志物對(duì)ALF患者中醫(yī)證候特點(diǎn)的分布無影響。 實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論：1