強(qiáng)肝丸抗酒精性肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：肝纖維化(hepatic fibrosis)是指肝細(xì)胞發(fā)生壞死和炎癥刺激時(shí)，結(jié)締組織生長(zhǎng)因子異常增加而致成纖維細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)集聚，從而導(dǎo)致肝內(nèi)結(jié)締組織增生與沉積的病理過程，是各種肝病發(fā)展為肝硬化的必經(jīng)階段和病理變化途徑，目前認(rèn)為是可逆的。因此抗肝纖維化是治療肝病、防止肝纖維化向肝硬化發(fā)展的重要環(huán)節(jié)，而早期診斷肝纖維化是關(guān)鍵。雖然病理組織學(xué)檢查是肝纖維化診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但難以在臨床廣泛開展，而非創(chuàng)傷性的血清學(xué)檢查很容易被患者接受

2、，因此尋找可靠而敏感的血清學(xué)指標(biāo)和篩選有效的抗肝纖維化藥物一直是肝病研究的熱點(diǎn)。酒精性肝纖維化(alcoholic liver fibrosis AF)是酒精性肝硬化的早期階段，其可逆性已經(jīng)得到共識(shí)，目前臨床上治療肝纖維化尚缺乏療效確切的藥物，近年來研究顯示許多中醫(yī)方藥對(duì)肝纖維化有很好的治療效果。強(qiáng)肝丸是臨床上常用的治療氣血不足的肝郁脾虛、腎虛型慢性肝炎的有效復(fù)方。為了擴(kuò)大該藥的適應(yīng)癥，本實(shí)驗(yàn)在成功復(fù)制大鼠酒精性肝纖維化模型的基礎(chǔ)上，從

3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)角度探討酒精性肝纖維化發(fā)生發(fā)展的機(jī)理以及“強(qiáng)肝丸”抗酒精性肝纖維化的作用，為臨床預(yù)防和治療酒精性肝纖維化新藥的研法提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)，并為“強(qiáng)肝丸”進(jìn)一步推廣應(yīng)用提供依據(jù)。 1、實(shí)驗(yàn)方法 1.1、肝纖維化模型制備： SD大鼠140只(雌雄各半)，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后隨機(jī)取10只大鼠作為正常組，剩余130只大鼠全部用于模型制備。采用“白酒、植物油、吡唑”混合液灌胃，配合飼喂高脂飼料的方法復(fù)制動(dòng)物模型，造模時(shí)間為1

4、6周，每周連續(xù)灌胃6天后休息1天。具體方法是：首先將白酒、植物油、吡唑三種成分按重量比1000:250:3的比例混合成懸液，然后于每天上午8:00～9:00，下午6:00～7:00用該混和液給模型組大鼠灌胃，灌胃量為1.5ml/100g。每周一在灌胃前給大鼠稱重，根據(jù)動(dòng)物體重變化估算每周的灌胃劑量，全部模型組大鼠飼喂高脂飼料(高脂飼料配方：基礎(chǔ)飼料、膽固醇、豬大油三者的比例為79％：1％：20％)，自由飲水?？瞻讓?duì)照組大鼠飼喂普通飼料，

5、生理鹽水灌胃，自由飲水。 1.2、實(shí)驗(yàn)分組： 模型復(fù)制結(jié)束后，將模型組存活大鼠隨機(jī)分成5組：模型組(10只)、陽性西藥(秋水仙堿)治療組(10只)、高劑量中藥治療組(10只)、中劑量中藥治療組(10只)和低劑量中藥治療組(10只)。正常組和模型組大鼠以生理鹽水灌胃，灌胃量均為1ml/(100g·d)；藥物干預(yù)組灌胃給藥，劑量分別為1.4g/(Kg·d)、0.7g/(Kg·d)、0.35g/(Kg·d)，相當(dāng)于人臨床給藥量

6、的14倍、7倍、3.5倍，藥物治療時(shí)間為4周。治療結(jié)束后將所有存活大鼠用烏拉他(2ml/kg)麻醉后，肝門靜脈采血，分離血清，取部分大鼠肝組織常規(guī)石蠟包埋、切片行HE染色。 1.3、觀測(cè)指標(biāo)(1)動(dòng)物的一般情況，包括精神狀態(tài)、皮毛光澤度、食量、大小便等； (2)血生化指標(biāo)的測(cè)定，包括血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(A)、球蛋白(G)；放免檢測(cè)血清層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)酸(HA)

7、和Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)。 (3)光鏡下HE染色觀察各大鼠肝臟病理組織學(xué)改變，包括肝細(xì)胞脂肪變性、壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等：病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參照王泰齡法。 1.4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有關(guān)資料以-x±s和等級(jí)資料表示，應(yīng)用方差分析和多樣本秩和檢驗(yàn)分別對(duì)計(jì)量資料和等級(jí)資料進(jìn)行分析。 2、結(jié)果： 通過以上實(shí)驗(yàn)得到下列結(jié)果： 2.1、酒精性肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中血清中自蛋白和總蛋白沒有明顯變化2.2、層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)

8、酸(HA)和Ⅳ型膠原(Ⅳ一C)，此三項(xiàng)含量在酒精性肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中均呈升高趨勢(shì)，2.3、酒精性肝纖維化發(fā)生過程中伴隨肝細(xì)胞脂肪、糖和蛋白質(zhì)代謝紊亂； 2.4、實(shí)驗(yàn)性酒精性肝纖維化，其主要病理特征是肝竇毛細(xì)血管化和竇周纖維化； 2.5、復(fù)方強(qiáng)肝丸抗酒精性肝纖維化的作用機(jī)制主要為： (1)減輕肝臟細(xì)胞損傷和炎癥反應(yīng)，抑制膠原合成(2)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，減少肝細(xì)胞的免疫損傷(3)抑制ECM的合成、促進(jìn)ECM的降解