染料木黃酮抑制視網(wǎng)膜新生血管的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)建立高氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管的動(dòng)物模型，了解判斷血管增生的方法，觀察氧對(duì)視網(wǎng)膜VEGF、VEGFR-2(flk-1)、CDl05表達(dá)的影響，及染料木黃酮對(duì)幼鼠視網(wǎng)膜新生血管形成的抑制作用，探討其作用機(jī)制及臨床應(yīng)用。 方法： 1.選擇鼠齡為7d的C57BL/6幼鼠20只，隨機(jī)分為正常組及高氧組。將高氧組10只幼鼠置于氧濃度約為75％的密閉環(huán)境中連續(xù)生活5d后回到正常環(huán)境下繼續(xù)飼養(yǎng)5天，建立高氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管

2、的動(dòng)物模型。鼠齡17天時(shí)取眼球做石蠟包埋切片行HE染色計(jì)數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)目，以此來(lái)判斷視網(wǎng)膜新生血管的增殖程度；ADP酶法視網(wǎng)膜鋪片，觀察視網(wǎng)膜血管改變情況；免疫組織化學(xué)染色觀察視網(wǎng)膜中CD105表達(dá)的變化。 2.選擇鼠齡為7d的C57BL/6幼鼠30只，隨機(jī)分為治療組、DMSO組及高氧組。利用上述造模方法，給氧結(jié)束后，治療組幼鼠每天皮下注射25mg/kg染料木黃酮溶液，DMSO組及高氧組小鼠注入等量DMSO及生

3、理鹽水，鼠齡第17天時(shí)取眼球檢查，了解染料木黃酮對(duì)小鼠視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用及對(duì)視網(wǎng)膜VEGF、VEGFR-2(flk-1)、CD105表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1.高氧組與正常組相比，視網(wǎng)膜鋪片見(jiàn)視網(wǎng)膜有大量新生血管形成，結(jié)構(gòu)及分布紊亂；HE染色切片計(jì)數(shù)突破內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)，高氧組平均每個(gè)切面為36.33±1.66個(gè)，正常組每個(gè)切面平均少于1個(gè)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而且兩組幼鼠CD105的表達(dá)相比有

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明高氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管的動(dòng)物模型建立成功。 2.染料木黃酮治療組與高氧組及DMSO組相比，視網(wǎng)膜鋪片見(jiàn)視網(wǎng)膜血管分布較規(guī)則、密度減少，且皿染色平均每個(gè)切面突破內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)為17.56±2.65個(gè)，與高氧組及DMSO組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；DMSO組與高氧組比較，髓染色差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)，染料木黃酮治療組幼鼠視網(wǎng)膜VEGF、VEGFR