膜片鉗和電化學實驗技術在血竭單體化學成分龍血素B研究中的應用.pdf

1、對中藥和天然藥物的研究，特別是對其進行藥效物質(zhì)基礎和作用機理研究是中藥現(xiàn)代化進程中的關鍵問題之一，也是揭示中藥的科學本質(zhì)、開發(fā)創(chuàng)新藥物的基礎性工作。 血竭是我國的傳統(tǒng)名貴中藥之一，在防止心血管疾病、治療風濕疼痛癥、抗癌等方面開發(fā)利用潛力大。然而，目前對血竭藥理作用機理的研究大多集中在其活血化淤方面，為數(shù)不多的血竭鎮(zhèn)痛作用機理的研究也與其抗菌消炎止痛有關。由于血竭是一種中藥，其化學成分復雜，要想從分子水平上來解釋它的各種藥理效應，

2、理應闡明它的藥效物質(zhì)。針對當前中藥現(xiàn)代化進程中中藥藥理研究普遍存在的問題，即中藥藥理的研究對象到底是作為整體的中藥還是單個化學成分；怎樣更好的表達、分析和檢測中藥的藥理效應和它的有效成分的藥理效應；系統(tǒng)研究了傳統(tǒng)名貴中藥血竭中的一種重要成分――龍血素B。運用不同的研究手段分析了血竭產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用的藥理機制及其藥理效應，將中藥血竭本身與其化學成分的研究統(tǒng)一起來，確定了血竭干預痛覺信息中樞傳入的藥效物質(zhì)并且探討了這種藥效物質(zhì)在人工模擬生物膜―

3、―水/1,2二氯乙烷界面上的轉(zhuǎn)移機制，并將此研究作為中藥現(xiàn)代化中有效成分確定和藥理機制深入研究的一個例證。 本文首先應用全細胞膜片鉗技術觀察了龍血素B對小鼠三叉神經(jīng)節(jié)細胞河豚毒素敏感型(TTX-S)和河豚毒素不敏感型(TTX-R)兩類電壓門控鈉通道電流的影響。結果顯示，龍血素B對兩種類型鈉通道電流均有濃度依賴性抑制，并且影響鈉通道電流的失活過程，而對其激活和復活過程無明顯的影響，這就表明，這種抑制作用發(fā)生在鈉通道的失活態(tài)而非激活

4、態(tài)。這個結果與本實驗室以前對血竭所作的研究結果相比具有一致性，充分說明了龍血素B是血竭調(diào)制電壓門控鈉通道電流的有效成分。 為了進一步確定血竭產(chǎn)生上述鎮(zhèn)痛效應的藥效物質(zhì)――龍血素B的藥理機制，本文又采用電化學方法對其藥效物質(zhì)龍血素B進行循環(huán)伏安研究，進而對其電化學性質(zhì)以及在液/液界面的轉(zhuǎn)移機制進行探討。由于在生理pH條件下，許多具有生物活性的化合物或者藥物通常是可以離子化的，而且他們可以以中性形式或者離子形式存在于該pH環(huán)境中,或

5、者兩種形式共存于該pH環(huán)境中。通過對這些藥物在油/水界面的循環(huán)伏安研究可以得到有關這些藥物的生物學意義的物理化學特性，比如藥物的中性形式和離子形式在有機相和水相間的分配系數(shù)。結果表明，中性的酸性藥物可以通過界面質(zhì)子化反應來降低質(zhì)子的吉布斯自由能，即通過兩種機理(TIC和ACT)來實現(xiàn)中性藥物從水相進入到膜相中。因為生物體系中質(zhì)子的濃度是被嚴格控制的，這兩個機理在藥物學研究中具有重要的意義。另外，通過測量藥物在液/液界面(本文中的液液界面

6、是水/1，2二氯乙烷)體系中的分配系數(shù)，使我們能更好地理解可質(zhì)子化藥物是如何加速水相中的質(zhì)子向其他介質(zhì)(細胞膜)轉(zhuǎn)移的，這就為藥物研究提供了一種解釋生物環(huán)境中pH調(diào)節(jié)劑的行為有效的方法。 綜上所述，建立中藥藥效物質(zhì)的現(xiàn)代化研究――有效成分的確定和對其有效成分的進一步探討，并將此結果與本實驗室以前的結果相比較，確定龍血素B是血竭調(diào)制TG細胞電壓門控性鈉通道電流，產(chǎn)生頭面部鎮(zhèn)痛效應的主要有效成分。為了進一步的對這種有效成分進行深入的

7、考察，采用電化學循環(huán)伏安法對其進行液/液界面上轉(zhuǎn)移機制的研究。通過不同pH值條件下的循環(huán)伏安圖計算出龍血素B在水/1,2－二氯乙烷界面上轉(zhuǎn)移的標準離子分配系數(shù)、標準離子轉(zhuǎn)移電位和標準吉布斯自由能等，據(jù)此可以判定藥物是以哪種形式在液/液界面上發(fā)生轉(zhuǎn)移反應的以及這種藥物親脂性的大小。這種藥物轉(zhuǎn)移機理的研究對于更好的理解液/液界面的結構和藥物的釋放以及藥物的藥理、藥效作用都具有非常重要的意義。 本研究不僅有利于中藥血竭的進一步推廣，而