突變型p53與HSP70和HSP90的相互作用的研究.pdf

1、TP53基因編碼一種分子量為53kDa的蛋白質(zhì)，命名為p53。TP53基因的失活對(duì)腫瘤形成起重要作用。在所有惡性腫瘤中，50％以上會(huì)出現(xiàn)該基因的突變。TP53突變大多是由于單個(gè)氨基酸發(fā)生替換而導(dǎo)致的錯(cuò)義突變。突變p53蛋白依然保留著全長(zhǎng)序列，但是功能上卻從抑癌基因轉(zhuǎn)變?yōu)榘┗颉?br>　　熱休克蛋白(HSP)是生物受到環(huán)境中物理、化學(xué)、生物、精神等刺激時(shí)發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)而合成的蛋白質(zhì)，是一類高度保守的蛋白質(zhì)，普遍存在于原核和真核生物中。HS

2、P家族的功能十分重要，主要作為分子伴侶、影響細(xì)胞凋亡、參與免疫和提高細(xì)胞耐熱性。
　　在本文中，我們首先通過免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析的方法在含有p53R273H突變體的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468中鑒定與p53R273H相互作用的蛋白質(zhì)，一共鑒定到59個(gè)與p53R273H相互作用的蛋白。其中有9個(gè)蛋白為熱休克蛋白，其中屬于HSP70家族的有HSP70A2、HSP70A5、HSP70A6、HSP70A7、HSP70A8、HSP70A

3、1L，屬于HSP90家族的為HSP90AA1、HSP90AB1、HSP90B1。
　　然后，我們研究HSP70和HSP90對(duì)p53R273H蛋白功能的影響。我們將HSP90-AB1表達(dá)質(zhì)粒和一個(gè)HSP70-A5表達(dá)質(zhì)粒與p53R273H表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入Hek293細(xì)胞中，然后檢測(cè)p53R273H蛋白的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，HSP70和HSP90都能增強(qiáng)p53R273H的穩(wěn)定性，而且HSP70與HSP90共轉(zhuǎn)染比單獨(dú)轉(zhuǎn)染一種質(zhì)粒時(shí)p53R

4、273H的穩(wěn)定性更好。而用HSP70的抑制劑Pifithrin-μ或/和HSP90的抑制劑17-AAG處理MDA-MB-468細(xì)胞，則促進(jìn)p53R273H蛋白的降解。進(jìn)一步研究表明，在MDA-MB-468細(xì)胞中干擾p53R273H突變體抑制細(xì)胞增殖，用HSP70的抑制劑Pifithrin-μ或/和HSP90的抑制劑17-AAG處理MDA-MB-468細(xì)胞，抑制細(xì)胞增殖和遷移、促進(jìn)細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果說(shuō)明，HSP70和HSP90可能通過與p