高壓氧對(duì)大鼠腎移植后缺血再灌注腎組織IDO基因表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)構(gòu)建同系大鼠腎移植缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury,IRI)模型,觀察吲哚胺2,3-雙加氧酶( indoleamine2,3-dioxygenase, IDO)基因和白細(xì)胞介素-8(interleukin-8,IL-8)在移植腎組織和血中的表達(dá)變化以及高壓氧(hyperbaric oxygenation, HBO)治療對(duì)其表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討腎IRI的發(fā)生機(jī)制以及HBO對(duì)腎IRI的治療機(jī)

2、制。
　　方法:SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、腎移植組以及腎移植+HBO治療組(HBO治療組),每組又分為1h、3h和5h組。腎移植組單純行腎移植手術(shù),HBO治療組將腎移植后的大鼠分別于再灌注后0h、2h和4h置于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)氧艙內(nèi)行HBO治療1h,假手術(shù)組僅切除右腎,不做腎移植手術(shù)。腎移植后1h、3h和5h時(shí),腎移植組和HBO治療組取移植腎組織和血標(biāo)本,假手術(shù)組則于相應(yīng)時(shí)點(diǎn)取左腎組織和血標(biāo)本。采用HE染色觀察腎組織的病理改變

3、,采用免疫組織化學(xué)法、激光共聚焦掃描熒光顯微鏡(laser scanning confocal fluorescence microscope,LCFM)以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real time–PCR)檢測(cè)IDOmRNA和蛋白的表達(dá),采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)血中IL-8的含量,采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清肌酐(serum creatin

4、ine,SCr)含量。
　　結(jié)果:
　　1.腎組織病理變化:假手術(shù)組腎組織結(jié)構(gòu)正常。腎移植組在1h時(shí),可見(jiàn)腎間質(zhì)血管輕度擴(kuò)張充血,腎小球伴輕度增大,系膜細(xì)胞輕度增生,腎小管上皮細(xì)胞輕度腫脹并管腔輕度擴(kuò)張;在3h時(shí),可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞腫脹,呈顆粒樣變性;在5h時(shí),可見(jiàn)腎小球體積增大,伴少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管管腔擴(kuò)張,可見(jiàn)蛋白管型和紅細(xì)胞管型,上皮細(xì)胞明顯腫脹,呈顆粒樣變性。HBO治療組:在1h和3h時(shí),鏡下改變與腎移植組相

5、應(yīng)時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著差別;在5h時(shí)仍見(jiàn)腎小球體積增大,但僅有極少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管上皮細(xì)胞腫脹和小管擴(kuò)張減輕,蛋白和紅細(xì)胞管型減少。
　　2.腎功能改變:在1h、3h和5h各時(shí)間點(diǎn),與假手術(shù)組比較,腎移植組和HBO治療組SCr值均顯著增高(P<0.05);與腎移植組比較,HBO治療組SCr值在1h、3h時(shí)無(wú)明顯差異(P>0.05),但在5h時(shí)SCr值則明顯降低(P<0.05)。在同一組內(nèi),假手術(shù)組在1h、3h、5h組SCr值無(wú)明顯

6、差異(P>0.05),腎移植組在1h、3h、5h組SCr值隨時(shí)間延長(zhǎng),逐步顯著增高(P<0.05);HBO治療組3h和5h組與1h組比較SCr值顯著增高(P<0.05),3h組和5h組之間SCr值則無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　3.血清中炎癥因子IL-8的變化:在1h、3h及5h各時(shí)間點(diǎn)與假手術(shù)組比較,腎移植組IL-8水平顯著增高(P<0.05);HBO治療組在1h、3h時(shí)IL-8水平仍顯著高于假手術(shù)組(P<0.05),但在5

7、h時(shí)IL-8水平則無(wú)明顯差異(P>0.05);HBO治療組與腎移植組比較,在1h時(shí)IL-8水平無(wú)明顯差異,而在3h、5h時(shí)IL-8水平則顯著低于單純腎移植組(P<0.05)。
　　4.腎組織IDO基因的表達(dá)變化
　　(1)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腎組織IDO表達(dá):結(jié)果顯示IDO主要表達(dá)于腎小管,腎小球無(wú)表達(dá),并對(duì)各組IDO表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定量分析(積分光密度)。在1h時(shí)三組IDO表達(dá)的積分光密度值無(wú)顯著差異;在3h時(shí)腎移植組IDO積分

8、光密度值與假手術(shù)組也無(wú)顯著差異,在5h時(shí)則明顯增高(P<0.05);HBO治療組 IDO積分光密度值在3h、5h時(shí)明顯低于腎移植組(P<0.05)。
　　(2)激光共聚焦掃描熒光顯微鏡檢測(cè)腎組織IDO表達(dá):發(fā)現(xiàn)綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)-IDO光點(diǎn)主要分布于腎小管上皮細(xì)胞。
　　(3)腎組織IDOmRNA的表達(dá)變化:在1h時(shí)間點(diǎn),三組IDOmRNA表達(dá)水平無(wú)顯著差異;與假手術(shù)組

9、相比,腎移植組IDOmRNA表達(dá)水平在3h時(shí)無(wú)顯著差異,而在5h時(shí)則明顯增高(P<0.05);HBO治療組IDOmRNA表達(dá)水平在3h、5h時(shí)明顯低于腎移植組(P<0.05),但與假手術(shù)組無(wú)顯著差異。
　　結(jié)論:
　　1.腎移植再灌注后早期便出現(xiàn)了明顯的炎癥反應(yīng),炎癥因子IL-8的大量產(chǎn)生可加重腎缺血再灌注損傷。
　　2.腎移植后隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng),腎組織IDO的過(guò)表達(dá)可能是腎臟缺血再灌注損傷加重的重要機(jī)制之一。