光周期、鹽度、溫度對孤雌鹵蟲的滯育誘導效應研究.pdf

1、鹵蟲是一類生活在高鹽環(huán)境中的小型甲殼動物，因其休眠卵具有重要的經(jīng)濟價值，使得鹵蟲成為一種潛在的人工養(yǎng)殖經(jīng)濟品種。無論是孤雌生殖還是兩性生殖類型的鹵蟲都具有兩種繁殖模式:滯育模式（母體產(chǎn)休眠卵）和非滯育模式（母體產(chǎn)無節(jié)幼體）。目前尚無成熟的技術能實現(xiàn)鹵蟲繁殖模式的完全人工可控，繁殖模式的控制實際上涉及的是在昆蟲中研究比較集中的滯育誘導這一問題，通過明確環(huán)境生態(tài)因子對鹵蟲的滯育誘導效應、確定其滯育誘導敏感期，將有助于發(fā)明調(diào)控繁殖模式的方法和

2、闡釋滯育誘導的機制。為此，本文開展了如下四方面的工作:
　　1.利用孤雌生殖鹵蟲克隆種群為研究對象，通過實驗生態(tài)學方法研究了鹽度與溫度、鹽度與光周期、溫度與光周期組合對鹵蟲的滯育誘導效應，在鹽度與溫度組合中，利用雙因子重復數(shù)據(jù)方差分析顯示溫度對滯育胎次比例影響極顯著(p＜0.01)，鹽度的影響不顯著，而鹽度與溫度的交互效應不顯著;在鹽度與光周期組合中，雙因子重復數(shù)據(jù)方差分析結果顯示，光周期對鹵蟲滯育胎次比例的影響極顯著(p＜0.0

3、1)，鹽度的影響不顯著，而鹽度與光周期的交互效應極顯著(p＜0.01);在溫度與光周期組合中，雙因子重復數(shù)據(jù)方差分析結果顯示，溫度(p＜0.01)、光周期(p＜0.01)對滯育胎次比例均有極顯著的影響，溫度與光周期的交互效應極顯著(p＜0.01)。研究結果顯示長光照周期和較高溫度更有利于非滯育模式的發(fā)生，但長光照周期對非滯育模式誘導的效應可以被高鹽度抵消，然而溫度對繁殖模式的影響不受高鹽度的干擾。與溫度相比，光周期對繁殖模式的影響作用更

4、大，當溫度與光周期對繁殖模式的影響效應相反時，繁殖模式更多的是表現(xiàn)光周期的影響效應。另外，所有各組的研究結果顯示，除了個別胎次，繁殖模式與胎次間無明顯相關性。
　　2.在確定了光周期、溫度和鹽度對克隆種群的滯育誘導效應的基礎上，通過設置非滯育模式養(yǎng)殖條件和滯育模式養(yǎng)殖條件間的轉移養(yǎng)殖試驗，研究并確定了鹵蟲具有滯育誘導敏感期;該滯育誘導敏感期處于后期幼蟲Ⅲ期和后期幼蟲Ⅳ期之間，該時期生殖節(jié)部位最主要的特征如下:從側面觀，卵囊端已自由

5、懸掛于腹節(jié)腹面，并超過生殖節(jié)，達到第三腹節(jié)的中央;組織學特征顯示在滯育誘導敏感期卵巢發(fā)育階段為卵黃發(fā)生前卵母細胞期。
　　3.在確定滯育誘導敏感期的基礎上，通過克隆ArHsp22基因的編碼區(qū)部分片段并利用q RT-PCR半定量研究了兩種繁殖模式下滯育誘導敏感期前、滯育誘導敏感期和滯育誘導敏感期后三個發(fā)育階段該基因的表達情況，結果表明在滯育模式下，ArHsp22 mRNA表達量在滯育誘導敏感期后較滯育誘導敏感期和滯育誘導敏感期前顯著

6、升高;在非滯育模式下，三個發(fā)育階段無顯著差異;而在滯育誘導敏感期，滯育模式與非滯育模式間ArHsp22 mRNA表達量無顯著差異，提示該基因可能與滯育誘導并無關聯(lián)，而僅與成體本身應對極端環(huán)境以及保護休眠胚胎有關。
　　4.基于昆蟲黑化誘導激素(Corazonin，Crz)及其受體結構上與甲殼動物的促性腺激素釋放激素(GnRH)及受體有著最近的親緣關系，并且Crz激素與昆蟲的滯育誘導具有密切的相關性，本文通過免疫組織化學和蛋白免疫印

7、跡的方法研究了GnRH受體類似物在鹵蟲體內(nèi)的分布以及在滯育誘導敏感期前、中、后三個階段的差異性表達。結果表明，GnRH受體類似物主要位于鹵蟲眼柄的感光系統(tǒng)區(qū)，視神經(jīng)神經(jīng)節(jié)區(qū)，視葉髓質(zhì)區(qū);部分腦區(qū);小顎器的端囊以及部分排泄管區(qū);生殖節(jié)的卵殼腺，而在卵母細胞無明顯陽性反應物出現(xiàn)。蛋白免疫印跡半定量分析顯示:非滯育模式下，GnRH受體類似物表達量在不同發(fā)育階段無顯著性差異，三個發(fā)育階段表達量相當。在滯育模式下，GnRH受體類似物表達量在滯育誘