CCAR-1在中國鹵蟲胚胎滯育解除過程中的作用.pdf

1、中國鹵蟲(Artemiasinica)是一種廣溫、耐高鹽的小型甲殼動物。廣泛分布于沿海鹽池和內陸鹽湖中，有較強的抗逆能力。在惡劣外界環(huán)境的條件下能產出休眠卵，其胚胎發(fā)育被阻滯。當環(huán)境條件適宜時，滯育解除，胚胎重新發(fā)育。
　　細胞分裂周期、凋亡調控蛋白Ⅰ(celldivision cycle and apoptosis regulator proteinⅠ，CCAR-1又稱CARP-1)在細胞周期進程中發(fā)揮重要作用，與其他細胞周期調

2、控蛋白復合，促進細胞凋亡。
　　在Wnt通路中，CCAR-1與β-catenin功能共激活，協(xié)助β-catenin在Wnt目標基因作用中的轉錄激活;CCAR-1與APC/C亞基APC-2結合，在CFM-4的激活下，阻礙細胞進入G2/M期，參與caspase泛素蛋白酶途徑，導致cyclinB1蛋白缺失。CCAR-1通過與腫瘤抑制基因P53的結合，并作為P53的共激活劑，在轉錄調控的過程中起到作用，同時，其作為一種促凋亡信號，調控細胞

3、周期;CCAR-1和p160共激活劑復合物，在核內作用于目標基因產生適當?shù)募に?。因此，CCAR-1在細胞周期調控過程中發(fā)揮重要作用，但其在中國鹵蟲滯育及滯育解除過程中的細胞周期調控的作用尚需進一步探究。
　　本研究采用RACE、基因組步移(Genome Walking kit)技術得到中國鹵蟲As-CCAR-1的部分cDNA序列，并對其進行了生物信息學分析。以Real-Time qPCR、原位雜交、免疫熒光等技術對CCAR-1在鹵

4、蟲的不同發(fā)育時期、低溫、高鹽脅迫下的表達量、表達模式和表達部位進行了研究。
　　通過RACE技術獲得As-CCAR-1基因片段序列，片段長1594bp，內包含1584bp的ORF序列，包含3個結構域:S1-Like、DBC1和SAP。信息學分析預測分子量為129kDa，理論等電點為4.99，為疏水性蛋白。亞細胞定位實驗表明As-CCAR-1蛋白位于細胞質內，各細胞器均有所分布。Real-Time qPCR結果顯示在胚胎滯育解除，發(fā)

5、育的中后期具有最高的表達量(3d)，低溫和高鹽脅迫下的表達顯著降低。原位雜交實驗結果顯示As-CCAR-1基因在中國鹵蟲個體發(fā)育全階段、各組織均有所表達。上述實驗結果說明，As-CCAR-1基因與調控細胞周期及細胞凋亡有關，且廣泛分布于鹵蟲體內。初步證明其參與了中國鹵蟲滯育解除過程中促進細胞凋亡的作用。
　　本研究旨在闡明CCAR-1基因在中國鹵蟲滯育解除及胚胎生長發(fā)育過程中的作用，對進一步開發(fā)利用鹵蟲資源有重要的的指導意義，對細