中國(guó)鹵蟲(chóng)API5在早期胚胎發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)及其功能研究.pdf

1、中國(guó)鹵蟲(chóng)隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門(mén)(Phylum Arthropoda),甲殼動(dòng)物亞門(mén)(Crustacea),鰓足綱(Branchiopoda),無(wú)甲目(Order Anostraca),鹵蟲(chóng)科(Family Artemiidae),鹵蟲(chóng)屬(Genus Artemia)。中國(guó)鹵蟲(chóng)廣泛分布于我國(guó)內(nèi)蒙、西藏、新疆、青海、山西等地的鹽湖、鹽井等高鹽水體中,并且是一種優(yōu)質(zhì)的生物餌料被應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)。
　　 Apoptosis inhibitor5(

2、API5)在中國(guó)鹵蟲(chóng)的胚胎發(fā)育過(guò)程中起著重要的作用。API5是細(xì)胞凋亡抑制相關(guān)蛋白,在脊椎動(dòng)物與無(wú)脊椎動(dòng)物中調(diào)控細(xì)胞凋亡。本研究采用分子克隆技術(shù),得到長(zhǎng)度為403bp的中國(guó)鹵蟲(chóng)API5基因片段。并利用3’-5'RACE技術(shù),克隆了全長(zhǎng)為1711bp的中國(guó)鹵蟲(chóng)API5基因的cDNA序列。經(jīng)Blast在線分析軟件的分析研究,確定該序列為中國(guó)鹵蟲(chóng)API5基因(GenBank accession No.:JF808079)。
　　 實(shí)驗(yàn)

3、利用Real-time PCR技術(shù)對(duì)API5基因在中國(guó)鹵蟲(chóng)胚胎發(fā)育各時(shí)期的表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)原腸胚時(shí)期基因的相對(duì)表達(dá)量最高；胚胎發(fā)育0h～10h,API5基因的相對(duì)表達(dá)量逐漸升高；胚胎發(fā)育15h～40h期間,基因的相對(duì)表達(dá)量逐漸降低；胚胎發(fā)育3d～7d期間,基因的相對(duì)表達(dá)量逐漸升高；發(fā)育10d時(shí),基因的相對(duì)表達(dá)量下降；總體呈現(xiàn)先升高后降低再升高的趨勢(shì)。研究表明API5基因是中國(guó)鹵蟲(chóng)胚胎發(fā)育過(guò)程中的重要調(diào)控基因,并且它在鹵蟲(chóng)滯育期

4、具有抑制凋亡以保證胚胎正常發(fā)育的功能。
　　 實(shí)驗(yàn)對(duì)其功能進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)了不同鹽度、溫度和菌刺激都會(huì)對(duì)API5基因的表達(dá)產(chǎn)生顯著影響。使用不同鹽度刺激鹵蟲(chóng)后,API5基因的相對(duì)表達(dá)量會(huì)隨著鹽濃度的增加而呈顯著升高的趨勢(shì)(p<0.01)。不同溫度刺激鹵蟲(chóng)后,API5基因的相對(duì)表達(dá)量隨著溫度的降低而呈逐漸升高的趨勢(shì)。使用革蘭氏陰性菌刺激中國(guó)鹵蟲(chóng)后,API5基因的相對(duì)表達(dá)量隨陰性菌液濃度增加而降低。而使用革蘭氏陽(yáng)性菌刺激中國(guó)鹵蟲(chóng)后,基