中國鹵蟲胚胎滯育解除過程中akt-pkb基因的作用及表達模式.pdf

1、本文采用RACE技術(shù)以中國鹵蟲為實驗材料對akt的cDNA全長序列進行了研究，利用原位雜交技術(shù)和實時熒光定量PCR技術(shù)分別對中國鹵蟲As-akt基因的表達部位以及As-akt和As-pdk1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1)在中國鹵蟲不同胚胎發(fā)育時期、鹽度和溫度脅迫中的表達量進行研究。中國鹵蟲(Artemia sinica)廣泛分布于鹽湖、鹽田等高鹽水體中，由于含有較高的不飽和

2、脂肪酸和蛋白質(zhì)等特點，是水產(chǎn)養(yǎng)殖中重要的開口餌料。中國鹵蟲的生殖方式存在卵胎生和卵生兩種方式。當環(huán)境脅迫時，中國鹵蟲以卵生方式產(chǎn)生滯育胚胎（滯育卵），以對抗干燥、寒冷、冰凍等惡劣環(huán)境，以減少不良環(huán)境對胚胎的影響。此時，胚胎停止發(fā)育，新陳代謝減慢。因此，滯育在中國鹵蟲應對環(huán)境脅迫，保護胚胎存活的的過程中起著非常重要的作用。絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶Akt也被稱做蛋白激酶B(PKB)，是細胞內(nèi)非常重要的一種信號分子。Akt在細胞生長，增殖，分化，

3、運動，葡萄糖穩(wěn)態(tài)，細胞存活以及細胞凋亡等多種胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。但對于akt基因在中國鹵蟲滯育解除過程中、胚胎發(fā)育過程中以及高鹽、低溫脅迫下的表達未見報道，有待進一步深入研究和分析。
　　分子克隆和生物信息學的實驗結(jié)果證明，中國鹵蟲的akt cDNA全長序列為1613bp，它包括1416bp的開放閱讀框(open reading frame，ORF)這段序列編碼472個氨基酸序列。使用ClustalX和MEGA4.0軟

4、件對中國鹵蟲akt基因的氨基酸序列與其他物種該基因的氨基酸序列進行分子進化分析，使用多種在線軟件對As-akt基因的氨基酸序列的信號肽、跨膜區(qū)域、親疏水性以及磷酸化位點等進行分析。Akt分子量為54.41kD，理論等電點為7.97。
　　原位雜交實驗結(jié)果顯示在0h-20h在胚胎中均勻分布，在40h，3d，5d主要分布在頭部、胸部、腹部以及附屬物質(zhì)里。實時熒光定量PCR實驗結(jié)果顯示As-akt和As-pdk1在中國鹵蟲胚胎發(fā)育的各時