HLA氨基酸殘基配型在角膜移植中的應(yīng)用研究.pdf

1、研究背景: 角膜病已成為僅次于白內(nèi)障的第二大致盲原因，目前治療角膜盲的主要手段仍然是角膜移植，但免疫排斥反應(yīng)仍是導(dǎo)致手術(shù)失敗的最主要原因。如何有效防治移植排斥反應(yīng)是提高角膜移植手術(shù)成功率的關(guān)鍵因素之一。 近年有關(guān)學(xué)者認(rèn)為：造成高危角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)的一個重要原因是供體和受體MHC 之間的抗原差異性和組織不相容造成的。關(guān)于HLA抗原配型在角膜移植中的應(yīng)用已有大量報(bào)道，但多為回顧性研究，也存在明顯爭議。以往采用的HLA

2、 六抗原配型標(biāo)準(zhǔn)在臨床應(yīng)用受到諸多客觀條件的限制，不便于術(shù)前的供體選擇。Terasaki 教授等提出的HLA 氨基酸殘基配型并應(yīng)用于腎移植取得成功經(jīng)驗(yàn)，提示角膜移植術(shù)前進(jìn)行HLA 配型成為可能。為此，本課題提出設(shè)想，通過HLA-Ⅰ類和HLA-Ⅱ類抗原位點(diǎn)檢測，將HLA 氨基酸殘基配型應(yīng)用于角膜移植的供體和受體選擇，以減少供體和受體之間的MHC 抗原差異，增加供體和受體之間的組織相容性，降低術(shù)后的排斥反應(yīng)發(fā)生率，提高手術(shù)成功率。

3、 方法、結(jié)果和結(jié)論: 1.離體角膜HLA 抗原表達(dá)的應(yīng)用基礎(chǔ)研究 目的：檢測離體角膜上皮和內(nèi)皮細(xì)胞HLA-A、B、C 和HLA-DR位點(diǎn)抗原的表達(dá)量，為角膜移植術(shù)前進(jìn)行HLA 組織配型提供一試驗(yàn)依據(jù)。 方法：對40 只健康成人離體眼球的角膜細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，采用間接免疫螢光技術(shù)標(biāo)記HLA-A、B、C 和HLA-DR 抗原，用ACAS-570 激光掃描細(xì)胞儀分析細(xì)胞表面抗原。 結(jié)果：正常角膜上皮和內(nèi)皮

4、細(xì)胞均可見HLA-A、B、C 位點(diǎn)的表達(dá)，而無HLA-DR位點(diǎn)的表達(dá)。角膜上皮和內(nèi)皮細(xì)胞的HLA-A、B、C 位點(diǎn)表達(dá)的熒光強(qiáng)度分別為601.0±22.6 和511.5±20.5（P<0.01）。 結(jié)論：正常成人眼角膜上皮和內(nèi)皮細(xì)胞存在有HLA-A、B、C 抗原的分布和表達(dá)。 2.HLA 氨基酸殘基配型應(yīng)用于外傷或角膜潰瘍的初步研究 目的：將HLA 氨基酸殘基配型應(yīng)用于嚴(yán)重眼外傷和感染性角膜盲患者術(shù)前的供受

5、體選擇，初步評價(jià)其在角膜移植中的作用。 方法：選擇4 例嚴(yán)重眼外傷和角膜潰瘍患者，術(shù)前供體和受體進(jìn)行HLA-Ⅰ類和HLA-Ⅱ類抗原位點(diǎn)檢測。HLA 檢測方法：單克隆抗體一步法或Micro-SSP 方法，或快速免疫磁珠法提取淋巴細(xì)胞，采用HLA 氨基酸殘基配型策略進(jìn)行HLA 氨基酸殘基配型，選擇HLA 抗原位點(diǎn)低錯配的供體和受體。角膜移植術(shù)后常規(guī)應(yīng)用抗排斥藥物治療。 結(jié)果：選擇低錯配的供體，未出現(xiàn)排斥反應(yīng)。 結(jié)

6、論：HLA-Ⅰ類和HLA-Ⅱ類抗原位點(diǎn)檢測方法簡便迅速、結(jié)果可靠，角膜移植術(shù)前進(jìn)行HLA 配型切實(shí)可行。 3.HLA 氨基酸殘基配型應(yīng)用于高危角膜移植 目的：初步評價(jià)HLA 氨基酸殘基配型應(yīng)用于高危角膜移植中的效果。 方法：44 例高危角膜盲患者，均為角膜新生血管豐富、角膜已結(jié)膜上皮化或藥物治療無效的感染性角膜潰瘍，根據(jù)HLA位點(diǎn)的相配數(shù)目分為4 組：HLA 的2 錯配組、3 錯配組、4 錯配組和5 錯配組

7、；又將2 錯配組和3 錯配組歸入低錯配組，將4 錯配組和5 錯配組歸入高錯配組。分析高危角膜病人與供體之間的HLA 抗原位點(diǎn)相配情況，并比較高錯配組和低錯配組的排斥反應(yīng)發(fā)生率。 結(jié)果：術(shù)后排斥反應(yīng)發(fā)生率為79.5％，在2、3、4 和5錯配組中分別為9.1％、11.3％、27.3％和31.8％。高錯配組和低錯配組的排斥反應(yīng)發(fā)生率分別為59.1％和20.4％，經(jīng)Fisher 精確檢驗(yàn)P=0.044，兩組間有顯著性差異，相對危險(xiǎn)度R

8、R=1.5。表明HLA高錯配組的排斥反應(yīng)發(fā)生率明顯高于低錯配組，其排斥反應(yīng)的危險(xiǎn)性是低錯配組的1.5 倍。低錯配組的用藥時間較短，出現(xiàn)排斥反應(yīng)時，藥物治療效果較佳，而高錯配組藥物治療效果欠佳，全身用藥時間較長。 結(jié)論：對于高危角膜患者，術(shù)前進(jìn)行HLA 氨基酸殘基配型選擇低錯配的供體，可降低排斥反應(yīng)發(fā)生率。 4.HLA 氨基酸殘基配型應(yīng)用于眼外傷后的角膜移植 目的：比較眼外傷后的高危角膜組和低危角膜組中HLA

9、 氨基酸殘基配型的作用程度，進(jìn)一步評價(jià)其應(yīng)用于眼外傷后的角膜移植中的效果。 方法：66 例（67 眼）外傷性角膜盲患者，分為新生血管豐富的高危角膜組（51 眼）和單純角膜白斑的低危角膜組（16眼），同樣根據(jù)HLA 位點(diǎn)的相配數(shù)目分為4 組：HLA 的2 錯配組、3 錯配組、4 錯配組和5 錯配組；又將2 錯配組和3 錯配組歸入低錯配組，將4 錯配組和5 錯配組歸入高錯配組。 結(jié)果：高危和低危角膜組的排斥發(fā)生率分別為7

10、6.5％和31.3 ％，χ2＝11.047，P=0.001，兩組間有非常顯著性差異。高危角膜組中，高錯配和低錯配組的排斥反應(yīng)率分別為90.5％和63.2％，經(jīng)Fisher 精確檢驗(yàn)P=0.00461，兩組間有非常顯著性差異，相對危險(xiǎn)度RR=1.772。低危角膜組中，高錯配和低錯配組的排斥反應(yīng)率分別為33.3％和25.0％，經(jīng)Fisher 精確檢驗(yàn)P=1.00，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。高危角膜組的排斥反應(yīng)較重，需要全身用藥，而低危角膜組排斥反應(yīng)輕，

11、局部用藥易于控制。 結(jié)論：眼外傷后新生血管豐富的高危角膜，術(shù)前進(jìn)行HLA氨基酸殘基配型選擇低錯配的供體可降低排斥反應(yīng)發(fā)生率，而對于低危角膜患者，術(shù)前HLA 配型意義不大。 小結(jié)，本課題通過應(yīng)用基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用研究緊密結(jié)合，在國內(nèi)率先將HLA 氨基酸殘基配型應(yīng)用于眼科領(lǐng)域，首次將HLA氨基酸殘基配型應(yīng)用于角膜移植術(shù)前的供受體選擇。術(shù)前通過選擇低錯配的供受體，降低了高危角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)發(fā)生率，提高了手術(shù)成功率。