氨基酸類陽(yáng)離子脂質(zhì)體在基因轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用研究.pdf

1、基因治療作為人類遺傳病和非遺傳性疾病最具潛力的治療藥物已經(jīng)引起了人類極大的興趣,基因治療的核心問(wèn)題是如何提高基因藥物的細(xì)胞傳遞效率。最近,具有良好生物相容性和生物降解性的氨基酸類陽(yáng)離子脂質(zhì)體,能在水相中形成易于基因藥物傳遞的囊泡或?qū)訝罱Y(jié)構(gòu),因此,引起了人類極大的關(guān)注。
　　 本實(shí)驗(yàn)合成了8種氨基酸類陽(yáng)離子脂質(zhì)TMA-C2-β-Ala-C12、TMA-C2-Va1-C12、TMA-C2-Met-C12、TMA-C2-Gly-C12

2、、Glu-C12、TMA-C2-Asp-C12、TMA-C2-Glu-C8、TMA-C2-Glu-C12。這些脂質(zhì)經(jīng)二次蒸餾水超聲分散后制得相應(yīng)的氨基酸類陽(yáng)離子脂質(zhì)體。這些氨基酸類陽(yáng)離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率通過(guò)用這些陽(yáng)離子脂質(zhì)攜帶EGFP-N1轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞來(lái)鑒定。結(jié)果表明,L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-蛋氨酸和甘氨酸為基礎(chǔ)的帶有一條疏水鏈的陽(yáng)離子脂質(zhì)沒(méi)有或者轉(zhuǎn)染效率很低,而那些帶有兩條鏈的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很高,TMA-C2-Glu

3、-C12的轉(zhuǎn)染效率比TMA-C2-Asp-C12的轉(zhuǎn)染效率要高。TMA-C2-Glu-C8和未經(jīng)季銨鹽修飾的Glu-C12沒(méi)有轉(zhuǎn)染效果。實(shí)驗(yàn)表明具有兩條疏水鏈、合適的疏水鏈長(zhǎng)度、有連接臂和親水性頭部以及合適的氨基酸種類都是高轉(zhuǎn)染效率的重要因素。
　　 用TMA-C2-Glu-C12轉(zhuǎn)染15種細(xì)胞系,同時(shí)以商業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine2000做陽(yáng)性對(duì)照。轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TMA-C2-Glu-C12的轉(zhuǎn)染效率與Lipof