陽(yáng)離子脂質(zhì)體為載體的基因體內(nèi)遞送效果研究.pdf

1、目的:
　　 考察自制的陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為載體，在小鼠體內(nèi)遞送DNA及RNA的效果及其體內(nèi)安全性。
　　 方法:
　　 (1)以熒光素酶為目的基因，分別以自制的8種陽(yáng)離子脂質(zhì)體為載體，對(duì)攜帶熒光素酶基因的質(zhì)粒pGFP-N2在小鼠體內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。通過(guò)WesternBlotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染后小鼠肺和肝臟中熒光素酶的表達(dá)，評(píng)價(jià)陽(yáng)離子脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)遞送DNA的效果。(2)以自制的4種陽(yáng)離子脂質(zhì)體為載體轉(zhuǎn)染小鼠，對(duì)載脂蛋白B

2、(ApoplipoproteinB，ApoB)進(jìn)行體內(nèi)RNA干擾。RT-PCR檢測(cè)小鼠肝臟中ApoBmRNA的表達(dá)，ELISA、WesternBlotting檢測(cè)小鼠肝臟及血漿中ApoB蛋白的表達(dá)，評(píng)價(jià)陽(yáng)離子脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)遞送siRNA的效果。(3)在進(jìn)行體內(nèi)轉(zhuǎn)染的同時(shí)通過(guò)考察小鼠的體重變化、內(nèi)臟變化、死亡率等指標(biāo)評(píng)價(jià)所用陽(yáng)離子脂質(zhì)體的體內(nèi)安全性。
　　 結(jié)果:
　　 (1)以自制的8種陽(yáng)離子脂質(zhì)體9、10、17、19

3、、20、21、22、CD01為載體進(jìn)行體內(nèi)DNA轉(zhuǎn)染，通過(guò)WesternBlotting檢測(cè)到轉(zhuǎn)染組小鼠肝臟和肺中有熒光素酶蛋白的表達(dá)，表明所考察的陽(yáng)離子脂質(zhì)體均有體內(nèi)遞送DNA的作用，且自制的陽(yáng)離子脂質(zhì)體和商品脂質(zhì)體Lipofectamine2000效果相近。殼聚糖作為促進(jìn)劑可以幫助脂質(zhì)體在體內(nèi)將質(zhì)粒運(yùn)送至靶器官和靶細(xì)胞。(2)分別以自制脂質(zhì)體9、21、CTA、CPA為載體進(jìn)行體內(nèi)RNA干擾，通過(guò)WesternBlotting及RT-

4、PCR的方法檢測(cè)到CTA及CPA干擾組的小鼠ApoB在mRNA及蛋白水平的表達(dá)明顯低于對(duì)照組，表明這兩種陽(yáng)離子脂質(zhì)體可在體內(nèi)將siRNA遞送至靶部位并使其發(fā)揮基因沉默作用。殼聚糖對(duì)RNA干擾效果有促進(jìn)作用。(3)所考察的陽(yáng)離子脂質(zhì)體-基因復(fù)合物尾靜脈注射會(huì)對(duì)小鼠的健康狀態(tài)產(chǎn)生影響，與Lipofectamine2000相比毒性較低。
　　 結(jié)論:
　　 實(shí)驗(yàn)考察的陽(yáng)離子脂質(zhì)體具有體內(nèi)遞送DNA及RNA的作用;有一定的毒性，