鼻腔鼻竇非霍奇金淋巴瘤與EB病毒感染的關(guān)系.pdf

1、【背景】 非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma，NHL)是一種起源于淋巴組織的惡性腫瘤。近年來分子實(shí)驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步使人們對NHL的認(rèn)識更加深入。研究顯示各種NHL在免疫表型組成上存在地域性差異，如成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤(Adult T-cell Leukemia/Lymphoma，ATLL)在日本及加勒比海地區(qū)更常見，而在西方國家很少見；鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤在東亞地區(qū)高發(fā)，B細(xì)胞淋巴瘤則在西方國家常見。此外

2、，研究發(fā)現(xiàn)，EB病毒(Eptein-Barr Virus，EBV)與多種人類腫瘤有關(guān)，NHL也是其一。廣州地區(qū)是EBV相關(guān)性惡性腫瘤——鼻咽癌的高發(fā)區(qū)，早前已有學(xué)者研究了該地區(qū)鼻咽部NHL的發(fā)病情況，在上呼吸道的另一部位——鼻腔鼻竇部，NHL的發(fā)病情況及免疫表型組成又如何?該部位各種類型NHL與EBV的關(guān)系是怎樣?此外EBV LMP1 C端序列變異可見于多種EBV相關(guān)性惡性腫瘤，且對其變異情況在腫瘤發(fā)生中所起的作用存在爭議。已知結(jié)外鼻型

3、NK/T細(xì)胞淋巴瘤與EBV關(guān)系密切，廣州地區(qū)鼻腔鼻竇NK/T細(xì)胞淋巴瘤感染的EBV LMP1 C端序列變異情況及意義又如何?本研究試圖探討以上幾個問題。 【目的】 回顧性分析中國廣州地區(qū)57例鼻腔鼻竇NHL的發(fā)病情況及免疫表型，探討其中各類型淋巴瘤與EBV感染的關(guān)系，研究EBV LMP1 C末端序列變異情況及其與NK/T細(xì)胞淋巴瘤的相關(guān)性。 【材料和方法】 1．收集過去6年中山大學(xué)腫瘤防治中心病理科57例

4、鼻腔鼻竇NHL病例，抽調(diào)蠟塊重新進(jìn)行H&E染色以觀察形態(tài)特征，采用LSAB法進(jìn)行AE1/AE3、CD45、CD20cy、CD79a、CD45RO、CD3ε、CD56、CD8及TIA-1系列免疫組化染色協(xié)助診斷及確定免疫表型，運(yùn)用EBV EBER原位雜交檢測EBV感染情況，進(jìn)一步明確診斷。 2.從確診的NK/T細(xì)胞淋巴瘤病例石蠟組織抽提DNA，根據(jù)文獻(xiàn)合成1對引物，行PCR擴(kuò)增其中EBV LMP1 C末端第三外顯子部分區(qū)域(產(chǎn)物

5、包括30bp缺失部分)，進(jìn)一步對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序以證實(shí)PCR產(chǎn)物的特異性和變異部位，利用生物信息學(xué)軟件進(jìn)行序列比對，分析30bp缺失情況，觀察LMP1基因的其他點(diǎn)突變。 3.采用電話詢問方式對其中有聯(lián)系方式的24例鼻腔鼻竇NHL病人進(jìn)行隨訪。 【結(jié)果】 1.在同期診斷的1412例NHL中，發(fā)生在鼻腔鼻竇者71例，占5.03﹪。本研究的57例中平均年齡48.9歲(3～75歲)，男女之比為2：1。44例為結(jié)外鼻型NK

6、/T細(xì)胞淋巴瘤(44/57，77.19﹪)，均呈EBER陽性，且瘤細(xì)胞均表達(dá)胞漿型CD3(cCD3或CD3ε)和顆粒狀的T細(xì)胞胞漿抗原1(TIA-1)。其中大部分(37/44，84.09﹪)為NK細(xì)胞腫瘤(EBV+/CD56+)，少數(shù)病例(7/44，15.91﹪)為細(xì)胞毒細(xì)胞表型(EBV+/CD56-)。B細(xì)胞淋巴瘤11例(11/57，19.30﹪)，其中彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤較多，共6例(6/11，54.55﹪；：EBV-)，其余分別為B

7、urkitt淋巴瘤(2例，EBV+)、髓外漿細(xì)胞瘤(1例，EBV+)、MALT淋巴瘤(1例，EBV-)及小B細(xì)胞淋巴瘤(1例，EBV-)。僅見2例外周T細(xì)胞淋巴瘤，非特殊型(2/57，3.51﹪；EBV-)。 2.在組織病理學(xué)方面，鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤的瘤細(xì)胞大小和形態(tài)變異甚大：可以主要為小的淋巴細(xì)胞樣，胞漿少，核濃染；可以主要是中等大小淋巴細(xì)胞樣，有少量胞漿，核濃染或淡染；可以主要是大淋巴細(xì)胞樣，有少量胞漿，核內(nèi)含明顯核仁。

8、鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤可并發(fā)鼻道被覆上皮的重度假上皮瘤樣增生(severe pseudoepithelioma-like hyperplasia)。 3.PCR結(jié)果顯示，44例鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤中37例有陽性擴(kuò)增。測序結(jié)果表明，30bp缺失存在于168285-168256處(346aa-355aa)，12例(12/37，32.43﹪)為野生型EBV-LMP1(wt-LMP1)，即不含30bp缺失。其中1例在168264(35

9、3aa)及168244位(366aa)位存在錯義突變；1例在168331位(330aa)存在錯義突變。25例(25/37，67.57﹪)為缺失型EBV-LMP1(del-LMP1)，即存在30bp缺失；除30bp缺失外，均在168320(334aa)、168308(338aa)及168225(366aa)位存在錯義突變，其中13例尚存在168317(335aa)位錯義突變。 4．隨訪資料顯示，18例在放療和/或化療后的6個月至

10、5年尚存活。6例在治療后1到3年死于該疾病。 【結(jié)論】 1．廣州地區(qū)鼻腔鼻竇NHL以鼻型NK/T淋巴瘤最多見，B細(xì)胞淋巴瘤次之，T細(xì)胞淋巴瘤少見。 2．廣州地區(qū)鼻腔鼻竇鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤均有EB病毒感染，多數(shù)是EBER+/CD56+免疫表型，少數(shù)為EBER+/CD56-細(xì)胞毒性免疫表型。 3．鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤組織學(xué)形態(tài)呈多形性，明確的病理診斷需要結(jié)合臨床表現(xiàn)、免疫組化及原位雜交等。 4．