負(fù)載BMP與VEGF的PDLLA組織工程材料修復(fù)兔橈骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.采用兔骨髓組織，通過(guò)梯度離心法獲取骨髓基質(zhì)細(xì)胞，在體外培養(yǎng)傳代，觀察該細(xì)胞的生物學(xué)特性及成骨能力。 2.研究新型多孔超聚消旋聚乳酸(PDLLA)支架材料的體外細(xì)胞相容性，探討制備負(fù)載BMP及VEGF的PKLLA支架材料可行性。 3.評(píng)價(jià)同時(shí)負(fù)載BMP及VEGF的PDLLA支架材料的體內(nèi)成骨能力，進(jìn)行兔橈骨缺損的修復(fù)試驗(yàn)并探討在動(dòng)物體內(nèi)成骨的量效關(guān)系，以得到一種較好的可吸收骨構(gòu)建材料。 方法：1.抽取新西

2、蘭兔骨髓，用全骨髓培養(yǎng)法獲取單核細(xì)胞，經(jīng)條件培養(yǎng)液體外誘導(dǎo)、擴(kuò)增。通過(guò)倒置相差顯微鏡、細(xì)胞染色、掃描電鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞與材料的附著情況，并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線 (MTT法)檢測(cè)各組細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期變化情況。采用堿性磷酸酶染色(ALP)和Ⅰ型膠原免疫組化染色進(jìn)行骨髓基質(zhì)細(xì)胞成骨特性的鑒定。 2.貼壁法培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)，經(jīng)體外礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)、擴(kuò)增后，與實(shí)驗(yàn)組A(含5

3、mgBMP與100μgVEGF微球PDLLA)、實(shí)驗(yàn)組B(活性玻璃陶瓷材料BGC)及對(duì)照組(空白PDLLA)分別進(jìn)行體外復(fù)合培養(yǎng)；并通過(guò)定性及定量檢測(cè)細(xì)胞在材料表面的粘附能力、增殖活力，驗(yàn)證細(xì)胞材料復(fù)合體的成骨活性，比較分析各組支架材料之間的差異。 3.制備新西蘭大白兔右撓骨中段12mm骨缺損實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組和空白組，實(shí)驗(yàn)組植入同時(shí)負(fù)載5mgBMP、VEGF微球及1X106個(gè)已向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)的BMSCs的PDLL

4、A、對(duì)照組植入負(fù)載5mgBMP及1X106個(gè)已向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)的BMSCs的PDLLA，空白組僅制作骨缺損模型，不植入任何成骨材料。術(shù)后對(duì)動(dòng)物進(jìn)行大體觀察、攝X線片觀察各組不同時(shí)相骨缺損修復(fù)情況、比較不同時(shí)相的骨缺損區(qū)X線阻射密度、并于術(shù)后第4，8，12周取出骨缺損區(qū)標(biāo)本進(jìn)行大體觀察和組織學(xué)切片觀察，圖像分析骨小梁的生數(shù)量，并取第12周標(biāo)本進(jìn)行生物力學(xué)檢測(cè)。 結(jié)果：1.兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞經(jīng)條件培養(yǎng)液體外誘導(dǎo)、擴(kuò)增，骨髓基質(zhì)細(xì)胞ALP染

5、色陽(yáng)性率超過(guò)80％，體外培養(yǎng)的細(xì)胞能合成較多量Ⅰ型膠原，均表明所獲得的骨髓基質(zhì)細(xì)胞是成熟的成骨細(xì)胞，可以做為骨組織工程中一種良好的種子細(xì)胞。 2.兔BMSCs 在三組支架材料的表面均能生長(zhǎng)，經(jīng)體外誘導(dǎo)后在支架材料的表面形成鈣結(jié)節(jié)，實(shí)驗(yàn)組A與B細(xì)胞的粘附及增殖能力均強(qiáng)于對(duì)照組(P<0.05)3.負(fù)載BMP 及VEGF的PDLLA 支架材料12周三點(diǎn)折彎強(qiáng)度為(52.38±2.56)MPa，純 PDLLA 為(29.83±3.14)

6、MPa，相比差異有顯著性(P<0.01)，負(fù)載BMP及VEGF的PDLLA 與 PDLLA 在術(shù)后各時(shí)期骨形成評(píng)分高于對(duì)照組(p<0.01). 結(jié)論：1.所獲得的骨髓基質(zhì)細(xì)胞是成熟的成骨細(xì)胞，可以做為骨組織工程中一種良好的種子細(xì)胞。 2.兔BMSCs與新型多孔PDLLA支架材料有良好的細(xì)胞相容性，可作為骨缺損的組織工程材料。 3.負(fù)載BMP 及 VEGF 的 PDLLA 支架材料具有良好的生物相容性和可吸收性，修