朱砂對大鼠腦組織抗氧化指標(biāo)、氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)及必需金屬元素含量的影響.pdf

1、前言
　　 朱砂(Cinnabar)為硫化物類礦物辰砂族辰砂,味甘,性寒,有毒,入心經(jīng),具有清心鎮(zhèn)驚,安神解毒之功效。朱砂作為藥用在我國已有上千年的歷史,應(yīng)用十分廣泛?，F(xiàn)行四大國家標(biāo)準(zhǔn)(《中華人民共和國藥典》、《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第1-20冊、《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編·中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)部分》和《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)·新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第1-44冊)中收載的含朱砂的成方制劑有362種,占其收載成方制劑總數(shù)的5.

2、2％,其中有許多為人們喜好的常用和著名品種(如安宮牛黃丸、朱砂安神丸、小兒金丹片、小兒百壽丸等)。近年來,由于受傳統(tǒng)用藥習(xí)慣(認(rèn)為中藥無毒副作用和不良反應(yīng),可長期連續(xù)服用)的影響,臨床上因未科學(xué)(長期、超量和不規(guī)范)合理使用單味朱砂或其復(fù)方制劑引起不良反應(yīng)或中毒事件報道日益增多,朱砂的主要成分為硫化汞(HgS),另外還含有少量可溶性汞和游離汞。硫化汞難溶于水,在胃腸道中不易被分解、吸收而從糞便中排出,無明顯的毒副作用,而可溶性和游離汞易

3、被機體吸收,對人體具有極大的毒性。朱砂中可溶性汞含量多少直接決定朱砂毒性大小。大量內(nèi)服朱砂可能會轉(zhuǎn)化成甲基汞而增加中毒機會。近年來,汞對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒性作用引起了人們的廣泛關(guān)注。臨床研究、流行病學(xué)調(diào)查和動物實驗均顯示長期接觸汞可導(dǎo)致精神、行為障礙,能引起智能下降、共濟失調(diào)、語言障礙、聽力及視力障礙,肢體感覺障礙,出現(xiàn)肌肉長期、劇烈、自發(fā)性刺痛或燒灼痛。因此,闡明朱砂對神經(jīng)系統(tǒng)的毒性機制對于指導(dǎo)臨床合理用藥,保護健康具有重要的理論和現(xiàn)實

4、意義。
　　 材料與方法
　　 中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物部提供Wistar大鼠32只,體重150±10g,雌雄各半,正式實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,按體重隨機分成4組,每組8只,第1組為空白對照組,第2、3、4組依次為朱砂低(1g/kg)、中(2g/kkg)、高(4g/kg)劑量組?？瞻讓φ战M灌胃同體積0.3％CMC-Na溶液,其余三組灌胃不同濃度朱砂混懸液。每天1次,每周7天,共2周。灌胃容量全部為10ml/kg。最后一次灌胃2

5、h后,10％水合氯醛(0.4ml/100g)腹腔注射麻醉大鼠,腹主動脈取血,并加肝素抗凝。然后迅速開顱取完整的大腦,并根據(jù)檢測酶學(xué)指標(biāo)的不同,制備成相應(yīng)的勻漿液待用(冰浴下進行)。
　　 第一部分體外實驗:采用柱前衍生化-高效液相色譜紫外檢測法測定朱砂在人工胃液中可溶性汞含量。
　　 第二部分體內(nèi)實驗:采用冷原子吸收法測定大鼠血液、腦組織中汞含量,采用試劑盒法測定抗氧化指標(biāo)MDA含量、GSH含量和SOD活性。蛋白含量測定

6、:考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白含量。采用原子吸收分光光度法測定大鼠腦組織中Ca、Mg、Zn、Cu的含量。采用高效液相色譜熒光檢測法測定大鼠腦組織中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的含量。
　　 結(jié) 果
　　 體外實驗表明,朱砂中存在可溶性的汞,其含量為0.190m/g(n=5,RSD=2.7％)。
　　 體內(nèi)實驗表明,經(jīng)過朱砂灌胃染毒,與對照組(0.04±0.01μg/g)相比較,實驗組大鼠的腦組織中汞含量明顯升高(低劑量組0.23±0

7、.07μg/g、中劑量組0.24±0.09μg/g、高劑量組0.26±0.03μg/g)。染毒后大鼠腦組織SOD、GSH含量均有明顯升高,SOD由對照組的116.52±11.96 U/mg Pro分別升高至低劑量組171.50±28.81U/mg Pro、中劑量組178.05±29.78U/mg Pro、高劑量組136.41±24.62U/mgPro。GSH含量由對照組的8.39±0.70μmol/g Pro分別升高至低劑量組11.31

8、±2.22μmol/g Pro、中劑量組12.07±1.85μmol/g Pro、高劑量組9.91±1.09μmol/g Pro。且升高的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。MDA.含量由對照組的2.83±0.59nmol/g Pro分別升高至低劑量組2.85±0.43nmol/g Pro、中劑量組3.75±0.58nmol/g Pro、高劑量組6.47±0.63nmol/g Pro。
　　 朱砂對大鼠腦組織中Ca、Mg、Zn、Cu元素含量也有一

9、定的影響:與對照組比較,各實驗組Ca、Cu含量均有升高趨勢,且Ca的升高具有統(tǒng)計學(xué)差異。Mg含量有降低趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。Zn元素有降低趨勢,與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 大鼠腦組織中五種氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)天冬氨酸(ASP)、甘氨酸(GLY)、?；撬?TAU)、γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(GLU)含量也有較明顯的下降趨勢。
　　 結(jié)論
　　 1、朱砂中含有可溶性汞,Hg可透過血腦屏障進入腦中；<