離子對大腸桿菌生長的影響以及大腸桿菌生物被膜的初步研究.pdf

1、目的:通過分光光度法及麥?zhǔn)媳葷岬确椒▽Υ竽c桿菌菌液濃度進(jìn)行測定,了解大腸桿菌不同生長時(shí)期生長曲線的特征,分析不同濃度的鐵、鋅離子對大腸桿菌生長狀況的影響,為微量元素用于大腸桿菌的體外培養(yǎng)和生物被膜的形成提供參考數(shù)值;通過藥敏試驗(yàn)了解不同濃度的鐵、鋅離子對阿奇霉素抗菌活性的影響;通過生物被膜銀染色觀察、細(xì)菌計(jì)數(shù)等方法并以硅膠為載體建立大腸桿菌生物被膜的體外模型,了解大腸桿菌生物被膜的形成,并研究生物被膜的形成鑒定標(biāo)準(zhǔn)及阿奇霉素與黃連素的聯(lián)

2、合用藥效果,為阿奇霉素和黃連素聯(lián)合應(yīng)用于大腸桿菌生物被膜感染的治療提供依據(jù)。
　　方法:1分別測量大腸桿菌不同生長時(shí)期的菌液的OD值,以時(shí)間為橫坐標(biāo),以O(shè)D值為縱坐標(biāo)建立坐標(biāo)系,繪制出大腸桿菌生長曲線;給MH培養(yǎng)基中加入不同濃度的鋅、鐵離子,混勻接種之后,利用分光光度法測定的OD值反應(yīng)大腸桿菌菌液濃度,建立時(shí)間---OD值坐標(biāo)系,通過曲線的走向來分析鐵、鋅離子對大腸桿菌生長的影響;2通過紙片擴(kuò)散法的藥敏試驗(yàn),比較不同鐵離子和鋅離子

3、濃度下阿奇霉素對大腸桿菌抑菌圈直徑的影響;3以硅膠為載體建立大腸桿菌生物被膜模型,用細(xì)菌計(jì)數(shù)法比較阿奇霉素與黃連素的聯(lián)合用藥和單獨(dú)用藥的藥效。
　　結(jié)果:1大腸桿菌的生長曲線基本符合微生物的生長特性,并且呈現(xiàn)二次生長曲線的特征。從生長曲線圖來看,加入鐵離子濃度分別為11,17,27,32μmol/L,各組加入鐵離子的大腸桿菌菌液的OD值都比對照組高,其中27μmol/L鐵離子濃度下大腸桿菌菌液的OD值顯著高于對照組,但當(dāng)鐵離子濃度

4、達(dá)到32μmol/L時(shí),其OD值要比鐵離子濃度為27μmol/L時(shí)的OD值要小;即通過試驗(yàn)比較,在設(shè)計(jì)的不同鐵離子濃度中,鐵離子濃度為27μmol/L時(shí)大腸桿菌菌液的OD值最大。鋅離子濃度分別為6,12,18,52μmol/L時(shí),與對照組相比,各濃度鋅離子組大腸桿菌菌液的OD值都低于對照組;但鋅離子濃度在12-18μmol/L濃度范圍內(nèi)菌液OD值幾乎沒有明顯改變,數(shù)值比較穩(wěn)定。2鐵離子濃度分別為11,17,27,32μmol/L的培養(yǎng)基

5、中大腸桿菌的抑菌圈直徑進(jìn)一步證明了鐵離子對大腸桿菌生長的促進(jìn)作用;同樣鋅離子濃度為6,12,18,52μmol/L的培養(yǎng)基中抑菌圈直徑也再次說明鋅離子對大腸桿菌生長有抑制作用;各濃度鐵、鋅離子對阿奇霉素的抑菌活性均無明顯影響。3利用銀染色方法鑒定,成功建立大腸桿菌生物被膜模型,配制0.15,0.3,0.6 mg/L的阿奇霉素溶液與0.2,0.4,0.8mg/L的黃連素溶液,通過單獨(dú)用藥和兩兩聯(lián)合用藥后的大腸桿菌細(xì)菌計(jì)數(shù)值分析比較,當(dāng)黃連

6、素濃度達(dá)到0.8mg/L才出現(xiàn)明顯的協(xié)同抑菌作用,且阿奇霉素的協(xié)同作用與其濃度無關(guān)。
　　結(jié)論:鐵離子對大腸桿菌的生長有一定的促進(jìn)作用,但與其濃度有很大關(guān)系。低濃度時(shí)幾乎無促進(jìn)作用,隨著鐵離子濃度的增加其作用開始增強(qiáng),但到達(dá)一定濃度后其作用不但不會增強(qiáng)反而有所減弱。鋅離子在正常血清濃度11-23μmol/L范圍內(nèi)對大腸桿菌的生長有抑制作用,在機(jī)體缺乏鋅離子的情況下,較為容易感染大腸桿菌。鋅離子在12-18μmol/L濃度范圍內(nèi)作用