RNAi聯(lián)合CTLA4-Ig阻斷B7-CD28共刺激通路在小鼠心臟移植中抗排斥作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:觀察CTLA4Ig聯(lián)合shRNA阻斷樹突細胞B7/CD28共刺激通路在小鼠心臟移植中的抗排斥作用,并探討其抗排斥機制。
　　 方法:采用培養(yǎng)基細胞因子選擇法體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源DC,應(yīng)用己構(gòu)建的針對B7-1(CD80)及B7-2(CD86)的shRNA質(zhì)粒載體pB7shRNA轉(zhuǎn)染DC,流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染前后DC表面抗原CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c表達水平；建立小鼠異位心臟移植模型,設(shè)置A組(異系對照組)、B組(

2、未轉(zhuǎn)染DC組)、C組(轉(zhuǎn)染DC組)、D組(CTLA4-Ig治療組)、E組(未轉(zhuǎn)染DC+CTLA4-Ig治療組)、F組(轉(zhuǎn)染DC+CTLA4-Ig治療組)。觀察各組移植心臟存活時間,評定術(shù)后7天移植物排斥反應(yīng)病理分級,以熒光實時定量PCR檢測移植物中IL-2mRNA表達水平。
　　 結(jié)果:經(jīng)過體外培養(yǎng),每只小鼠可獲得1.5-2×107個骨髓來源DC,細胞具備典型樹突狀結(jié)構(gòu),pB7shRNA質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染DC后經(jīng)流式細胞儀檢測其表面抗

3、原CD80、CD86表達變化由93.57％、70.07％分別下降至30.83％、40.06％,而MHCⅡ、CD11c表達無明顯變化。與異系對照組和未轉(zhuǎn)染DC組相比,轉(zhuǎn)染DC+CTLA4-Ig治療組移植心臟存活時間明顯延長(中位生存期25天vs8天和8天);排斥反應(yīng)病理分級明顯降低;IL-2mRNA表達明顯降低；IL-2mRNA表達與排斥反應(yīng)病理分級呈明顯正相關(guān)。
　　 結(jié)論:pB7shRNA可顯著抑制小鼠骨髓DC B7表達。術(shù)前

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