CTLA4Ig、ICOSIg聯(lián)合雷帕霉素對(duì)心臟移植排斥的影響.pdf

1、第一部分
　　 小鼠耳后心臟一直模型的建立
　　 目的：建立一種改良的小鼠心臟移植模型，以進(jìn)行心臟移植免疫排斥的研究。方法：受體小鼠麻醉、耳廓消毒，于耳廓背側(cè)中線(xiàn)下1/3 處做3～4 mm 橫切口，沿皮下用眼科顳向耳尖方向鈍性分離，形成一個(gè)約2 mm×5 mm 狹長(zhǎng)皮下孔道，末端稍擴(kuò)大成囊袋狀，充以乳酸林格氏液；24h 之內(nèi)的新生乳鼠劍突下取心，置于0～4℃無(wú)菌乳酸林格氏液中搏動(dòng)1至2次；心臟置入受體準(zhǔn)備好的皮下囊袋中，

2、心臟離體時(shí)間2分鐘以?xún)?nèi)。結(jié)果：初期同系小鼠心臟移植存活率達(dá)80％，同種異體移植存活率達(dá)63.6％，熟練操作后同種異體移植存活率達(dá)98.1％。結(jié)論：該改良型小鼠耳后心臟移植模型穩(wěn)定且易于觀(guān)察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明已成功建立起小鼠耳后心臟移植模型。
　　
　　 第二部分
　　 CTLA4Ig 聯(lián)合雷帕霉素對(duì)小鼠心臟移植排斥的影響
　　 目的：觀(guān)察雷帕霉素聯(lián)合CTLA4 Ig對(duì)小鼠心臟移植存活時(shí)間的影響。方法:建立小鼠

3、耳后心臟移植模型，隨機(jī)分為四組：A組對(duì)照組不給藥，B組移植后0，2，4d 腹腔注射CTLA4 Ig 150ug/kg，C組移植后當(dāng)天開(kāi)始連續(xù)14天灌胃給予雷帕霉素1mg/kg，D組移植后0，2，4d 腹腔注射CTLA4 Ig 150ug/kg，連續(xù)14天灌胃給予雷帕霉素1mg/kg；觀(guān)察各組移植心臟存活時(shí)間，移植后第八天取材送檢，HE 染色觀(guān)察心肌浸潤(rùn)情況。結(jié)果：小劑量CTLA4和雷帕霉素聯(lián)合用藥較對(duì)照組、單獨(dú)用藥組心臟移植存活時(shí)間雖短

4、暫延長(zhǎng)，但差異不具有顯著性；聯(lián)合用藥組淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)較其他組明顯減少。結(jié)論：小劑量CTLA4Ig和雷帕霉素聯(lián)合用藥在未能有效延長(zhǎng)移植心臟存活時(shí)間的情況下已初步表現(xiàn)出抑制心臟移植免疫排斥的協(xié)同作用。
　　
　　 第三部分
　　 CTLA4Ig、ICOSIg 聯(lián)合雷帕霉素對(duì)心臟移植排斥的影響
　　 目的：觀(guān)察CTLA4Ig、ICOSIg 聯(lián)合雷帕霉素對(duì)小鼠心臟移植排斥的影響。方法：建立小鼠耳后心臟移植模型，隨機(jī)

5、分為四組：A組對(duì)照組不給藥，B移植后0，2，4d 腹腔注射CTLA4Ig 250ug/kg，1，3，5d 腹腔注射ICOSIg100ug/kg，C組移植后0～14d 腹腔注射雷帕霉素0.5mg/kg，D組移植后0，2，4d 腹腔注射CTLA4Ig 250ug/kg，1，3，5d 腹腔注射ICOSIg 100ug/kg， 0～14d 腹腔注射雷帕霉素0.5mg/kg；觀(guān)察各組小鼠移植心臟存活時(shí)間；移植后第八天取材送檢HE 染色，觀(guān)察心肌淋

6、巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況；免疫組化指標(biāo)檢測(cè)心肌bcl-2，bax表達(dá)。結(jié)果：1. A組存活時(shí)間為13.1天，B組存活時(shí)間13.7天，C組存活時(shí)間19.4天，D組存活時(shí)間22天。D組較其他組有顯著差異；2. D組心肌淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)較其他組明顯減輕；3. D組bcl-2表達(dá)較其他組明顯增多，bax表達(dá)較其他組明顯減少，提示心肌細(xì)胞凋亡較其他組明顯減輕。結(jié)論：CTLA4Ig、ICOSIg 聯(lián)合雷帕霉素三者協(xié)同作用能較其他組明顯抑制急性排斥反應(yīng)，改善移植心