轉(zhuǎn)染CTLA4Ig基因的同供體大鼠DC細(xì)胞對胰島移植物存活的影響.pdf

1、目的:觀察膠原酶消化法、Ficoll 400密度梯度離心法對大鼠胰島的分離純化效果.方法:用膠原酶法分離、Ficoll 400密度梯度離心法純化胰島.用DTZ法判定胰島的純度;用AO/PI法判定胰島存活率;用胰島素釋放試驗判定胰島功能.目的:探索樹突狀細(xì)胞(DC)及其前體的分離純化及其體外擴(kuò)增的方法,為進(jìn)一步研究樹突狀細(xì)胞的功能、特性及臨床應(yīng)用提供技術(shù)方法.方法:無菌制備SD大鼠骨髓,先后用紅細(xì)胞裂解液、抗鼠CD4、CD8、B細(xì)胞單抗(

2、McAb)和補體溶液,依次去除紅細(xì)胞、T、B細(xì)胞、粒細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞等混雜細(xì)胞而獲得純化的DC及其前體,又在粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和白細(xì)胞介素(IL-4)協(xié)同誘導(dǎo)下培育,DC前體分化發(fā)育成DC并擴(kuò)增,形態(tài)學(xué)觀察、表型檢測、功能學(xué)實驗鑒定DC.目的:通過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將CTLA4Ig基因轉(zhuǎn)染DCs,探討轉(zhuǎn)CTLA4Ig基因的樹突狀細(xì)胞(DCsRev)誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫耐受的可能性.方法:通過重組逆轉(zhuǎn)錄病毒將目的基因C

3、TLA4Ig轉(zhuǎn)染到大鼠骨髓來源的DCs中,通過RT-PCR、免疫組化、Dot-ELISA方法檢測目的基因CTLA4Ig在DCs中的表達(dá),通過混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢測DCsRev抑制T細(xì)胞免疫反應(yīng)的能力.目的:研究轉(zhuǎn)染CTLA4Ig基因的同供體大鼠DC細(xì)胞對同種大鼠胰島移植的影響.方法:鏈尿菌素(STZ)60mg/kg體重腹腔內(nèi)注射制作SD大鼠糖尿病模型,膠原酶法分離、Ficoll 400密度梯度離心法純化胰島,GM-CSF+IL-