新鮮和培養(yǎng)后的胰島細胞對移植胰島存活的影響.pdf

1、背景:1型糖尿病是由于胰島細胞中的β細胞的選擇性的破壞而造成的一種慢性自身免疫性疾病。近幾十年來，1型糖尿病的發(fā)病率逐年升高。外源性胰島素雖可調(diào)節(jié)1型糖尿病患者的血糖，但胰島素過量使用或頻繁地調(diào)整血糖均可能導(dǎo)致嚴重的低血糖發(fā)生;同時患者血漿中血糖水平若波動過大，也可導(dǎo)致糖尿病相關(guān)并發(fā)癥發(fā)生。而胰島細胞移植具有手術(shù)風(fēng)險小、特異性高、符合生理和針對病因治療等優(yōu)點。胰島細胞移植為治療1型糖尿病的較理想方法，并有望徹底治愈1型糖尿病。但移植胰島

2、長期存活率低，5年存活率約10％左右。有研究發(fā)現(xiàn)，早期移植胰島的存活情況將直接影響胰島移植的效果。由于目前胰島細胞移植前是否需要培養(yǎng)尚有爭議，故本實驗通過對小鼠的新鮮和培養(yǎng)后胰島細胞移植后胰島的再血管化及功能比較，探討兩者對移植胰島早期存活的影響，為改善胰島移植效果提供理論依據(jù)。
　　目的:觀察新鮮和培養(yǎng)后的小鼠胰島細胞對移植后胰島的再血管化及功能的影響。
　　方法:通過腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)糖尿病C57 BL/6

3、小鼠模型，模型小鼠隨機分成A、B、C三組(n=10)。同基因小鼠作為胰腺供體，膠原酶P溶液充分灌注胰腺，水浴靜止消化后，F(xiàn)icoll400不連續(xù)梯度純化獲得胰島細胞。雙硫腙(DTZ)染色，顯微鏡下觀察移植胰島形態(tài)、數(shù)量，同時檢測胰島細胞的分泌功能及活性。三組模型小鼠分別接受不同處理后胰島細胞的腎被膜下移植。A組:250IEQ（直徑＞150um為1個IEQ）新鮮胰島移植;B組:培養(yǎng)1天的250IEQ胰島移植;C組:培養(yǎng)3天的250IEQ胰

4、島移植。術(shù)后觀察移植小鼠的血糖變化，并于術(shù)后第14天取移植胰島分別進行HE染色，免疫組化檢測胰島素、CD31表達，并計算其微血管密度(microvascular dens ity, MVD)。
　　結(jié)果:糖尿病小鼠造模成功率為83％。每只C57 BL/6小鼠可獲得200±10個IEQ胰島細胞，純度為80±5％。胰島細胞生物活性的測定:培養(yǎng)第5天的胰島細胞在低糖和高糖刺激相胰島素分泌量分別為(25.34±2.12)mU/L和(76.

5、32±2.25) mU/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，刺激指數(shù)(SI)為3.02±0.03，提示純化后的胰島細胞功能良好。三組糖尿病小鼠接受同量胰島細胞移植后，前三天隨機血糖均＜11.0mmol/L，A組血糖＜11.0mmol/L可持續(xù)14天以上，B、C組血糖三天后持續(xù)上升，14天后均＞11.0mmol/L。三組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，A組分別與B組、C組血糖變化比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05，p＜0.05

6、);B組和C組血糖比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。HE染色見A組胰島移植的胰島細胞團較規(guī)則，細胞質(zhì)和細胞核分離明顯，存活狀態(tài)良好;B組移植胰島細胞團欠規(guī)則，細胞質(zhì)及細胞核分離欠佳，存活狀態(tài)欠佳，C組移植胰島細胞團明顯不規(guī)則，可見胰島細胞團的破壞。免疫組化法檢測胰島素表達發(fā)現(xiàn)，A組小鼠腎被膜下成團的細胞被染成棕褐色，B組及C組上述少量類似細胞團僅有著色。免疫組化法檢測CD31表達發(fā)現(xiàn)，A組小鼠腎被膜下移植細胞團內(nèi)部有大量細胞胞質(zhì)被