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文檔簡介
1、目的:在大鼠同種心臟腹腔異位移植模型中,使用TLR2單克隆抗體(Tolllikereceptor2monoclonalantibodies,TLR2mab)聯(lián)合TLR4單克隆抗體(Tolllikereceptor4monoclonalantibodies,TLR4mab)預處理受體大鼠,研究TLR2mab聯(lián)合TLR4mab對受體自身免疫調節(jié)以及其對同種異體移植免疫排斥反應的影響,探索其誘導受體大鼠產生免疫耐受的可能,進而揭示其部分機理。
2、
方法:將供體Wistar大鼠及受體SD大鼠隨機分成四組,A組(空白組):僅行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔異位心臟移植;B組(TLR2mab組):術前一天受體SD大鼠按100ug/kg腹腔注射TLR2mab,行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔異位心臟移植,手術成功后以每兩天100ug/kg腹腔注射維持;C組(TLR4mab組):術前一天受體SD大鼠按100ug/kg腹腔注射TLR4mab,行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔異
3、位心臟移植,手術成功后以每兩天100ug/kg腹腔注射維持;D組(TLR2mab聯(lián)合TLR4mab處理組):術前一天受體SD大鼠按100ug/kg腹腔注射TLR2mab和TLR4mab,行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔異位心臟移植,手術成功后以每兩天100ug/kg腹腔注射維持。觀測指標:移植心臟的存活時間、病理改變;移植術后第7天抽取受體SD大鼠外周血,流式細胞儀檢測各組受體外周血中CD4+CD25+Treg細胞比例及Foxp3蛋白表
4、達檢測結果;ELISA法檢測移植后受體外周血中TNF-α、IFN-Υ、IL-6、IL-2、IL-10、TGF-β1變化,以及半定量PCR和熒光定量real-timePCR檢測外周血單個核細胞中NF-κB、MYD88、IRF1的mRNA表達情況。
結果:(1)供心平均存活時間(MST):A組:7.8±0.84天,B組:25.8±2.48天,C組:24.8±2.15天,D組32.6±3.26天。D組供心平均存活時間較A、B、C
5、組明顯延長,P<0.05;且B、C組與A組比較,P<0.05。(2)受體外周血CD4+CD25+Treg細胞及Foxp3蛋白表達檢測結果:A組:2.5±0.47%,42.68±5.47%;B:7.98±1.33%,63.12±5.14%;C:8.98±1.48%,67.54±4.37%;D:19.08±1.46%,82.02±4.61%。D組中CD4+CD25+Treg細胞及Foxp3蛋白表達均明顯高于A、B、C組,P<0.05,有統(tǒng)計
6、學差異;B、C組與A組比較,P<0.05,有統(tǒng)計學差異。(3)外周血TNF-α(pg/ml):A組:538.59±13.7;B組:271.19±44.07;C組:268.77±29.06;D組:157.18±26.77。D組TNF-α表達量較A、B、C三組明顯降低,P<0.05;B、C組與A組相比,P<0.05,有統(tǒng)計學意義。(4)外周血IFN-Υ(pg/ml):A組:527.67±62.13;B組:176.83±17.35;C組:15
7、4.25±18.44;D組:104.99±14.39。D組IFN-Υ表達量較A、B、C三組明顯降低,P<0.05;B、C組與A組相比,P<0.05,有統(tǒng)計學意義。(5)外周IL-6(pg/ml):A:302.21±20.76;B:113.59±15.07;C:100.07±13.98;D:64.75±11.21。D組IL-6表達量較A、B、C三組明顯降低,P<0.05;B、C組與A組相比,P<0.05,有統(tǒng)計學意義。(6)外周血IL-2
8、(pg/ml):A組:5.87±0.22;B組:2.94±0.13;C組:3.6±0.14;D組:2.11±0.14;D組IL-2表達量較A、B、C組明顯降低,P<0.05;B、C組與A組相比,P<0.05,有統(tǒng)計學差異。(7)外周血IL-10(pg/ml):A組:23.91±3.51;B組43.46±4.25;C組35.75±5.68;D組63.31±4.53。D組IL-10表達量較A、B、C組增加,P<0.05;B、C組與A組相比,
9、P<0.05,有統(tǒng)計學差異。(8)外周血TGF-β1(pg/ml):A組:120.74±7.05;B組:164.91±14.25;C組:169.6±10.38;D組:201.36±12.36。D組TGF-β1表達量較A、B、C組明顯升高,P<0.05;B、C組與A組相比,P<0.05,有統(tǒng)計學差異。(9)受體外周血單核細胞中NF—κB、MYD88、IRF1的mRNA表達情況。D組單核細胞中NF-κB、MYD88、IRF1的mRNA表達情
10、況與A、B、C組相比,明顯降低,P<0.05,有統(tǒng)計學差異。
結論:(1)應用TLR2mab和TLR4mab預處理受體大鼠,可以通過阻斷TLR2/4-Myd88-NF-κB和TLR2/4-Myd88-IFR1路徑,減輕移植后急性排斥反應。(2)在大鼠同種異體異位腹腔心臟移植模型中我們可以觀察到,TLR2mab和TLR4mab聯(lián)合預處理受體大鼠,與單用TLR2mab或TLR4mab預處理受體大鼠相比,可明顯延長心臟移植物的存
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